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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司
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M2亞基抑制劑(Triapine)

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產(chǎn)品型號(hào)

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷(xiāo)商

所  在  地上海市

更新時(shí)間:2022-05-24 15:11:56瀏覽次數(shù):199次

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貨號(hào) FS-X11051
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F1+2 (Rabbit prothrombin fragment 1+2) ELISA Kit 兔凝血原片段F1+2 CP,85.0%
ADM (Rabbit soluble endothelial protein C r

中文名稱(chēng):M2亞基抑制劑(Triapine)

英文名稱(chēng):Triapine

產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg

貨號(hào):FS-X11051

產(chǎn)品介紹:

Triapine是一種核糖核苷酸還原酶(ribonucleotide reductase,RR)的M2亞基抑制劑,是有效的放射致敏劑。

注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途!

號(hào):143621-35-6

別名:3-AP;泛811;OCX191;NSC663249

純度:98.32%

分子量:195.24

儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

培養(yǎng)操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);

4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;

2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;

5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

p53靶蛋白5抗體 TP53TG5

suan丙糖異構(gòu)mei抗體 Triosephosphate isomerase

細(xì)胞表面糖蛋白Trop2抗體(胰腺癌標(biāo)志物蛋白) TROP2

轉(zhuǎn)錄因子E3 TFE3

20號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框11抗體 C20orf11

末端脫氧核suan轉(zhuǎn)移mei抗體 TdT

跨膜蛋白TMED4抗體 TMED4

jia狀腺激su受體相關(guān)蛋白3抗體 Thrap3

肥大細(xì)胞類(lèi)胰蛋白meiβ2 TPSB2

suan化酪氨suan激meiB抗體 phospho-TrkB (Tyr515)

味覺(jué)受體蛋白家族2亞基9抗體 TAS2R9

細(xì)胞粘附分子1抗體 TSLC1
M2亞基抑制劑(Triapine)枯草芽孢桿 Kongensin A

雞傷門(mén)氏 Kazinol U

豬霍亂沙門(mén)氏 Isoscabertopin

阿木吉氏鏈霉 胡蔓藤堿乙

根異莖點(diǎn)霉 ent-16-Kaurene-3β,15β,18-triol

膠韌革(榆耳,榆蘑) ent-11β-Hydroxyatis-16-ene-3,14-

釀酒酵母 Deoxycalyciphylline B

膜醭畢赤酵母 Dehydroborapetoside B

地衣芽孢桿 Dehydroadynerigenin β-neritriosi

假堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿 Daturataturin A

近弧狀短波單胞 Chloramultilide C

節(jié)桿 Chloramultilide B

孢小克銀漢霉 Carabrolactone B

大腸桿 蒼山香茶菜

草木棲劍 Bisandrographolide C

 


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