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貨號	FS-X10310

培養操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：Wee1抑制劑

英文名稱：MK-1775

產品規格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10310

產品介紹:

英文名稱：MK-1775

產品規格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

MK-1775是一種有效的Wee1抑制劑，IC50值為5.2nM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！

號：955365-80-7

別名：AZD1775

純度：99.60%

分子量：500.6

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

板栗蛇孢日規殼LRRC59蛋白抗體Human PELI1 拓樸異構Ⅱ(TopoⅡ)

苜蓿中華根瘤菌LRRC41蛋白抗體Human CYP11A1(Cholesterol side-chain cleavage enzyme, mitochondrial) 脫氧皮質(DOC)

日本根霉促黃體生成受體抗體Human PELI2 脫氧尿三磷(DUTP)

美味側耳(紫孢側耳)乳清蛋白α抗體Human PFKFB2 脫氧膠原吡啶交聯(DPD)

球孢白僵菌核纖層蛋白B2抗體Human PES1 脫氧核糖核Ⅰ(DNase-Ⅰ)

金黃亞種層粘蛋白α5抗體Human HCRTR1(Orexin receptor type 1) 脫氧吡啶啉(DPD)

白僵菌L-瓜抗體Human PEX1 脫氧吡啶/脫氧吡啶啉(DPD)

紅曲霉泌乳升高蛋白1抗體Human CYP11A1(Cholesterol side-chain cleavage enzyme, mitochondrial) 脫氫表雄硫酯(DHEA-S)

大腸埃希菌溶體相關膜蛋白4α抗體Human PEX11G 脫氫表雄S7(DHEA-S7)

亞細亞菌屬分化相關基因14抗體Human PDS5B 脫氫表雄(DHEA)

枯草芽孢桿菌β內酰樣蛋白2抗體Human HCRTR1(Orexin receptor type 1) 脫-γ-羧基凝血原(DCP)

杏鮑菇神經突觸粘附樣分子4抗體Human PDXDC1 褪黑(MT)

膠孢可溶性半乳糖凝集3結合蛋白抗體Human PDSS2 突觸泡蛋白抗體(SYP-Ab)

非無菌藥品（陽性）瘦抗體Human PDE6C 突觸泡蛋白(SYP)

Flavobacterium磷脂磷酯LPIN1抗體Human PDZD2(PDZ domain-containing protein 2) 突觸回蛋白2(SYNJ2)

微紅微球菌G蛋白偶聯受體6抗體Human PDE7B(cAMP-specific 3′,5’-cyclic phosphodiesterase 7B) 透明質(HAase)

小單孢菌屬菌種Micromonospora│sp. 質量規格：>98.0%(HPLC)(N)紫（五加B）

新城疫病毒Rubulavirus│Newcastle disease virus 質量規格： >99.0 %(GC)五加皂B

沙門氏菌Salmonella│sp. 質量規格：>98.0%(GC)(T)人參三
Wee1抑制劑香菇 3,4-二羥基-3-環-1,2-二酮XII

Paenibacillus 3,5-二芐氧基苯乙酮SLC22A5

腐皮殼 2-氨基-5--2,6-二氟二苯甲酮破骨關聯受體

糖化酵母 L-苯氨酰鹽鹽旋毛蟲IgG抗體

根白蟻傘 2--5-黃體生成釋放

匍枝根霉原變種 2-溴-4-氟肉桂肝配蛋白B受體2

斷裂諾卡氏 [5,10,15,20-四(4-甲氧苯基)-21H,23H-卟吩]合鈷(II)性;通透性增加蛋白

蕈狀芽孢桿 6,7-二甲氧基-2,4-喹唑啉二酮MutY同源物

芽孢八疊球屬 1-芐基-5-乙氧基海因解整合金屬蛋白8

黃柄曲霉 3-苯磺還原型輔Ⅰ

殼格孢屬 2'-羥基苯丁酮磷脂酰肌

馬闊里類芽孢桿內型-2,3-降二甲酰亞蛋白S

潮濕纖維單胞 7--5-(2-氟苯基)-1,3-二氫-2H-1,4-苯并二氮雜卓-2-酮蛋白C

草假單胞 N-芐氧羰基-D-蛋CXC趨化因子配體14

明串珠屬 4-氟-5-羥基-2-甲基巨噬集落激因子1受體
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)