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貨號	FS-X11053

培養操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：c-Met抑制劑（EMD-1214063）

英文名稱：EMD-1214063

產品規格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號：FS-X11053

產品介紹:

EMD1214063是高活性c-Met選擇性抑制劑，IC50為4nM，比對IRAK4，TrkA，Axl，IRAK1和Mer的抑制性高200倍以上。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！

號：1100598-32-0

別名：Tepotinib

純度：99.80%

分子量：492.57

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

tong基移換mei樣蛋白1抗體 TKTL1

破傷風毒su重鏈抗體 Tetanus Toxin heavy chain

膜型絲氨suan蛋白mei2抗體 TMPRSS4

抑癌蛋白TCHP抗體 TCHP

T細胞急性淋巴細胞性白血病1蛋白/淋巴瘤蛋白5抗體 Tal1

胚胎干細胞相關蛋白TXNDC9抗體 TXNDC9

轉錄因子9抗體 TCF9

轉錄因子THOC2抗體 THOC2

轉移生長因子β3（TGFβ3）抗體 TGF beta 3

轉化生長因子β（TGFβ）抗體 TGF beta 1

胸腺suβ4抗體 Thymosin beta 4

轉化生長因子β2（TGFβ2）抗體 TGF beta 2
c-Met抑制劑（EMD-1214063）嗜熱棲熱 Rauvotetraphylline A

松杉靈芝 Pterisolic acid D

釀酒酵母 Pterisolic acid A

大腸埃希氏 Psidial A

Lonsdalea quercina subsp. quercina 土槿甲 D

葡萄白腐 Pierreione B

釀酒酵母 Periglaucine A

枯斑擬盤多毛孢 Onitisin 2'-O-glucoside

尖孢鐮刀亞麻專化型 Neorauflavane

嗜熱雙歧桿嗜熱亞種 Methyl dodonate A

嗜堿芽孢桿 Isotaxiresinol 9,9'-acetonide

側耳 Gopherenediol

庫爾勒芽孢桿 Farrerol 7-O-glucoside

葡萄座腔 Epipterosin L 2'-O-glucoside

白地霉等效-6,9-二羥基-15-氧代-16-貝殼杉烯-19-
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)