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貨號 | FS-X11086 |
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培養操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;
5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
中文名稱:BMP抑制劑(DMH-1)
英文名稱:DMH-1
產品規格:1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg
貨號:FS-X11086
產品介紹:
DMH-1是一種有效的,具有選擇性的BMP抑制劑,對ALK1/ALK2/ALK3/ALK6的IC50值分別為27/107.9/<5/47.6nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他用途! 號:1206711-16-1 純度:99.65% 分子量:380.44 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
實驗報告:
一、分離與培養: 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養; 5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養; | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
磷suan化DNA拓普西異構meiⅡ抗體 phospho-TOPO II Alpha (Ser16)
磷suan化非受體型酪氨suan蛋白激meiTnk1抗體 Phospho-TNK1 (Tyr277)
環腺suan應答元件結合蛋白轉錄共激活因子TORC1抗體 TORC1
磷suan化CREB轉錄共激活因子TORC1抗體 Phospho-Torc1 (Ser151)
CREB轉錄共激活因子TORC2抗體 TORC2
腫瘤壞死因子β抗體(TNFβ) TNF beta
轉錄因子7類似物2抗體 TCF7L2
血栓suB2(一種新發現的抑癌基因)抗體 TBX2
tRNA剪接內切mei2抗體 TSEN2
腫瘤蛋白D53抗體 D53
睪特異絲氨suan/蘇氨suan激mei6抗體 TSSK6
腫瘤壞死因子受體相關因子7抗體 TRAF7
BMP抑制劑(DMH-1)黃暗青霉 野甘草屬
季也蒙畢赤酵母 Sanshodiol
酮叢毛單胞 Richenoic acid
黃曲霉 3-鄰(6-脫氧-beta-D-吡喃葡萄糖) 28-O-beta-D-吡喃葡萄糖雞納酯
白色短波單胞 前五味子 B
粉紅單端孢霉 Porson
大腸埃希氏 苦木西堿 S
球毛殼 苦木西堿 I
傷口埃希 Phaseollidin hydrate
莖生擬莖點霉 Panaxyne
淺紫灰鏈霉產色變種 矮陀陀堿 A
許旺酵母屬 Orientanol A
枯草芽孢桿 金粉蕨辛
丁香直絲鏈霉 Olean-12-ene-3,24-diol
和緩艾美爾球蟲(LZ株) Octacosyl (E)-ferulate
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
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