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上海鼎桑生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第6年

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Megazyme試劑盒的使用步驟

時(shí)間:2021/11/8閱讀:2387
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Megazyme試劑盒將目標(biāo)抗體包被于微孔板中,制成固相載體,向微孔中分別加入標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)本,其中的目標(biāo)連接于固相載體上的抗體結(jié)合,然后加入微生物化的目標(biāo)抗體,將未結(jié)合的生物素抗體洗凈后,加入標(biāo)記和親和素,在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成黃色,顏色的深淺和樣品中的目標(biāo)呈正相關(guān),用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度,計(jì)算樣品濃度。


  該試劑盒經(jīng)過(guò)改進(jìn)后,更加快速和靈敏,靈敏度是傳統(tǒng)己糖激酶法的兩倍,成本低,試劑配制后可穩(wěn)定保存2年, 采用試劑盒形式,包含檢測(cè)必需的所有酶,提供計(jì)算軟件,使數(shù)據(jù)處理更方便,包含標(biāo)準(zhǔn)品。原理上,將單位體積的谷物面粉提取物或發(fā)酵肉湯培養(yǎng)基在條件下用底物混合物孵育,通過(guò)加入弱堿性溶液終止反應(yīng)并使溶液變色,測(cè)定400nm下的吸光度值,該值與樣品中α-淀粉酶的含量直接相關(guān)。         


  Megazyme試劑盒操作步驟


  ①?gòu)氖覝仄胶?0min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。


  ②設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;


  ③樣本孔先加待測(cè)樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加。


  ④除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。


  ⑤棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次。


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