ELISA酶聯免疫吸附試驗，是一種常用的固相酶免疫測定方法。由于其快捷、且實驗結果成為如今實驗室的“寵兒”。正所謂“好馬配好鞍”，好的ELISA試劑盒也要有正確的儀器、樣本和操作方法才能檢測出好的實驗結果。

ELISA方法被廣泛應用于各種抗原和抗體測定。但ELISA測定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術要求，有時?？梢姷揭恍╁e誤結果（即假陽性或假陰性結果）。引起ELISA測定錯誤結果的原因主要有：①標本因素；②試劑因素；③操作因素。下面就讓上海勁馬何為您詳細講解關于ELISA試劑盒在實驗室中容易出現的錯誤結果分析：

1．內源性物質
（1）類風濕因子 人血清中IgM、IgG型類風濕因子（RF）可以與ELISA系統中的捕獲抗體及酶標記二抗的FC段直接結合，從而導致假陽性。
解決的辦法是：①用F（ab）2替代完整的IgG；②標本用聯有熱變性（63℃，10 min）IgG的固相吸附劑處理（將熱變性IgG加入到標本稀釋液中同樣有效）；③檢測抗原時，可以用2-巰基乙醇等加入到標本 稀釋液中，使RF降解。
（2）補體 ELISA系統中固相一抗和標記二抗過程中，抗體分子發生變構，其FC段的補體C1q分子結合位點被暴露出來，使C1q 可以將二者連接起來，從而造成假陽性。
解決的辦法是：①用EDTA稀釋標本；②用53℃，10 min或56℃，30 min加熱血清使C1q滅活。
（3）嗜異性抗體 人類血清中含有能與嚙齒類動物（如鼠等）IgG 結合的天然嗜異性抗體，可將ELISA系統中一抗和二抗連接起來，也能造成假陽性。
解決的辦法是：可在標本稀釋液中加入過量的動 物IgG ，但加入量不足或亞類不同時無效。
（4）嗜靶抗原的自身抗體 抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體，有時能與靶抗原結合形成復合物，在ELISA方法中均可干擾抗原抗體測定結果。
解決的辦法是：測定前需用理化方法將其解離后再測定。
（5）醫源性誘導的抗鼠IgG 抗體 臨床開展的用鼠源性CD3等單克隆抗體治療，用放射性同位素標記鼠源性抗體的影像診斷及靶向治療等新技術，均有可能使這些病人體 內產生抗鼠抗體；另外，被鼠等嚙齒類動物咬傷的病人體內也可以產生抗鼠IgG 抗體。這些病人ELISA測定時均可產生假陽性。
解決的辦法是：測定抗原時，在標本中加入足量的正常鼠IgG ，從而克服由于上述原因造成的假陽性。
（6）交叉反應物質 類地高辛、類AFP樣物質等，是與靶抗原有交叉反應的物質。在用多抗測定抗原時對測定結果影響不大，但在用單克隆抗體測定抗原時 ，如果交叉抗原決定簇正好是所用單克隆抗體相對應的靶決定簇時，也會出現假陽性結果。
（7）標本中其它成分的影響 血清脂質過高、*、血紅蛋白及血液粘度過大等，均對ELISA測定結果有干擾作用。
2．外源性物質
外源性物質常常是由于用于ELISA測定的血標本的采集、貯存等不當所致。如標本溶血、標本被細菌污染、標本貯存過久、標本凝集不全和*中添加物等影響。 
（1）標本受細菌污染 因菌體中可能含有內源性辣根過氧化物酶，因此，被細菌污染的標本同溶血標本一樣，亦可產生非特異性顯色而干擾測定結果。
（2）標本保存不當 在冰箱中保存過久的標本，血清中IgG可聚合成多聚體、AFP可形成二聚體，在間接法ELISA測定中會導致本底過深、甚至造成 假陽性；標本放置時間過長（如一天以上），有時抗原或抗體免疫活性減弱，亦可出現假陰性。

解決的辦法是：ELISA測定的血清標本宜為新鮮采集；如不能立即測定，5天內測定的血清標本可存放于4℃，1周后測定的血清標本應低溫凍存；凍存后融解的標本，蛋 白質局部濃縮，分布不均，應充分混合后再測定，但混勻時應輕柔，不可強烈振蕩。
（3）標本凝集不全 在沒有促凝劑和抗凝劑存在的情況下，正常血液采集后1/2~2h開始凝固，18~24h*凝固。臨床檢驗工作中，有時為了爭取 時間快速檢測，常在血液還未開始凝固時即強行離心分離血清，此時的血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測定過程中可以形成 肉眼可見的纖維蛋白塊，易造成假陽性結果；這類情況于次日復查時因血凝已*，血清中不再有纖維蛋白原存在，故復查結果變為陰性 。

解決的辦法是：血液標本采集后必須使其充分凝固后再分離血清，或標本采集時用帶分離膠的*或于采血 管中加入適當的促凝劑。
（4）標本管中添加物質的影響 抗凝劑（如肝素，EDTA）、酶抑制劑（如NaN3可抑制ELISA系統中辣根過氧化物酶活性）及快速分離血清的分離膠等均對ELISA測定有一定干擾作用。

以上是上海勁馬何為您提供ELISA試劑盒實驗的詳細講解，希望在實驗中對您有所幫助。綜上所述，對臨床檢驗ELISA測定中出現的假陽性或假陰性結果，在考慮試劑因素和操作因素之外，更多的應從標本因素方面進行分析，并應采取相應措施排除干擾作用，從而為臨床提供正確可靠的檢測結果。

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