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氨基轉移反應的定性鑒定操作方法:
將兔擊暈,迅速解剖,取出肝臟,在低溫條件下剪碎。稱取勻漿后,離心取上清液,即為制備的酶液。體外氨基移換反應。紙上層析法檢查每人4個點(標準*溶液、標準*溶液、對照上清液、樣品上清液)。點樣放入層析罩內。用被酚所飽和的水溶液,平衡后,用帶小漏斗的玻璃管從層析罩上加飽合酚試劑25ml于層析缸內。然后,立即蓋緊塞子,當溶劑前沿達到距濾紙上端約2.5cm處,取出濾紙,晾干或吹干,以除去酚溶劑,噴灑0.1%茚三酮乙醇溶液,放入烘箱中顯色氨基酸與茚三酮反應,在濾紙上呈現紫紅色斑點。
關鍵步驟與注意事項
① 取動物新鮮組織制備酶液,防止酶失活。
② 加碘乙酸抑制酶解作用。
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