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440次免疫PCR體系的組成
免疫PCR體系由待檢抗原,特異性抗體,連接分子,DNA和PCR擴增系統。以下為上海勁馬為大家提供的免疫PCR體系有哪些重要組成。咨詢。
1.待檢抗原 被檢測的樣品可以是抗原,或者是作為抗原的某種抗體。待檢的抗原可以直接吸附于固相(包被抗原),這一過程與ELISA試驗是相同的。
2.特異抗體 免疫PCR中的特異性是對應于待測抗原,與ELISA一樣,抗體的特異性和親和力將影響免疫PCR的特異性和敏感性。一般均選用單克隆抗體,這個抗體常采用*標記,通過親和或葉綠素再結合DNA。
3.連接分子 連接分子是連接特異抗體與DNA之間的分子。Sano等用鏈親和素/蛋白A(striptavidin-protein A)基因工程融合體作為連接分子來連接*標記的DNA與抗體,此種融合蛋白的鏈親和素部分可識別DNA上的*,蛋白部分可識別抗體的Fc段。
4.DNA和PCR系統 免疫PCR中的DNA是一指示分子,用DNA聚合酶將結合于固相上的DNA特異放大,由此定量檢測抗原。免疫PCR的敏感性多于ELISA主要是應用了PCR強大的擴增能力。免疫PCR中的DNA分子可以選擇任何DNA,但要保證DNA的純度,且有較好的均質性,盡可能不選用受檢樣品中可能存在的DNA。一般可選用質粒DNA或PCR產物等。DNA的*化是用*標記的dATP或dUTP通過聚合酶標記在DNA分子上,一般是1個分子DNA標記2個*,標記率可達。免疫PCR的PCR擴增系統與一般PCR一樣,主要包括引物、緩沖液和耐熱DNA聚合酶。
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