（1）吸附法：血清中小分子物質如三碘甲狀腺原氨酸（T3）、甲狀腺素（T4）等，可用活性炭吸附去除。這種方法簡便，但待測物質難以清除干凈，而且大分子活性物質不能用此法進行制備。
（2）反復凍融法：對大分子活性物質可選用低值血清，經反復凍融使被測物質失活。用這種方法可使某些蛋白類激素大部分失活，但也難以得到真正的零值血清。
（3）親和層析法：用特異性抗體制備親和層析柱，用以吸附被測抗原。用這種方法可以得到高質量的零值血清，但本法比較復雜而且成本也高。
2）標準物純品的選擇：應選擇高化學純和高免疫純的純品作標準品。其中免疫純尤為重要，在標準品中不應含有與被測物質有交叉反應的物質。
3）標準品的制備：先用零值血清配置高濃度的標準品，然后根據實驗系統的要求，用零值血清將高值血清稀釋至應有的濃度，制成符合預定要求的，由不同濃度組成的系列標準品。2．標準品的鑒定
1）免疫活性的鑒定：選用高特異性的抗血清分別作*標準品（如WHO的參考品或國家標準品）的待鑒定標準品的劑量反應曲線，并觀察兩條曲線的平行性。如兩條劑量反應曲線平行，說明兩種物質對同一抗體有相同的親和力，即二者是同質性物質。如兩條劑量反應曲線不平行，說明兩種物質具有異質性，因而這一待鑒定的標準品是不能使用的。
2）濃度的標定：用已鑒定過的，免疫活性合格的標準品，與*的標準品作濃度相同的劑量反應曲線。此時，兩條劑量反應曲線應該是基本重合的。如果兩者平行但不重合，則取兩條劑量反應曲線的50%結合處的相應劑量（ ED50 ）計算二者的換算系數，然后調整待鑒定標準品的濃度，直至使兩條劑量反應曲線*或基本重合為止。
3．標準品的計量：許多小分子抗原或半抗原已能得到純品或進行合成，它們對作為標準品的要求可以得到基本的滿足，其計量多直接用單位體積中的重量表示，如mg / ml、ng / ml 、pg / ml等。近WHO推薦用質量單位取代重量單位，即mol / L、mmol / L、或nmol / L等。對大分子的活性物質則比較復雜。由于得不到的純品，故很難直接用單位體積中的重量或單位體積中的質量計量。因此，常用該物質的生物活性單位表示，如IU / L、mIU / L等。