聚丙烯酰胺凝膠薄片35S、14C或3H的放射活性測定
1.用自顯影X線膠片作模板,切下含放射性目的蛋白的凝膠片段,已經干燥但尚未固定的凝膠很容易操作。
2.將凝膠薄片放入放射性計數(shù)小瓶中。
3.用小量的水(20u1/1X 5mm薄片)膨脹凝膠薄片(室溫30min)。
4.或將凝膠薄片溶解于1.0mi由19份30%的過氧化氫和1份14.8mol/L氫氧化銨組成的溶液中,37℃溫育過夜,然后加入水溶性閃爍液。
或加入10ml新鮮配制的氨/助溶劑/閃爍液(將0.5ml 14.8mol/LNH40H加10mlNCS助溶劑或Solusol內,混合,加至100ml以甲苯作溶劑的閃爍液內)。室溫下振搖溫育過夜(Ward,1970)。
聚丙烯酰胺凝膠薄片32P或125I放射活性測定
1.用自顯影x線膠片作模板,切下含放射性目的蛋白的凝膠片段。
2.將凝膠薄片放入放射性計數(shù)小瓶中,32p樣品可用Cerenkov法記數(shù),125I樣品用γ計數(shù)器記數(shù)。
注:Cerenkov記數(shù)法的效率取決于樣品的體積,應對相同大小的凝膠片段作比較。
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