日韩毛片在线视频-日韩毛片在线影视-日韩美aaa特级毛片-日韩美a一级毛片-久久夜夜操妹子-久久夜夜肉肉热热日日

上海金穗生物科技有限公司
免費會員

電穿孔法進行質體的轉形

時間:2013-2-20閱讀:258
分享:

方法步驟:
菌體的處理:
1) 進行轉形實驗的前16~20 h,將菌種JM109 接種在SOB 固體培養基上,并在37℃培養箱中培養。
34 Methods in Biotechnology Vol 1
2) 取80 mL SOB培養基裝入250 mL滅過菌的三角瓶。 另取1 mL SOB加于微量離心管中。由SOB固體培養基上選8 個約2~3 mm大小的單一菌落接入1mL SOB中,震蕩將菌體打散后,加入80 mL SOB中,于37℃震蕩培養約2~3h,直至細胞數約為4~7×107/mL。
3) 收集菌液于離心管中,置冰浴中10 min。
4) 以750~1,000 g 離心12~15 min (4℃)。
5) 倒去上清,并盡量將液體倒干,或以微量移液器頭吸干凈。
6) 沉淀加入80 mL 冰冷的無菌水,稍加震蕩,混合均勻后以750~1,000 g 離心12~15 min (4℃)。
7) 倒去上清,菌體再依序以40 mL 及1.6 mL 無菌水同法處理。
8) 菌體以0.16 mL 冰冷的10% glycerol 懸濁。
9) 菌液每80 μL分裝一管,可直接用于electroporation,或以液態氮或干冰快速凍結后置 -70℃貯存。
Electroporation:
1) 進行electroporation 的DNA 樣品溶液中離子強度不可過高,DNA 需先經過透析或以酒精沉淀處理。透析可如2.3.1 節步驟15) 進行。
2) Cuvettes 自包裝中取出后,置冰浴中至少5 min。
3) 將菌液置于冰浴中,加入DNA 樣品,混合后,小心將溶液吸至cuvette 的凹槽中,將cuvette 置冰浴中。
4) 進行electroporation 時,將cuvette 由冰浴中取出,將四周水份擦干,置于反應槽中,并接上電極線。
5) 以2.5 kV, 21 μF 進行electroporation。
◆ 注意!高電壓!
6) 取出cuvette,立即加入1 mL SOC。
7) 吸出菌液移至微量離心管中,于37℃震蕩培養45 min。
8) 取200 μL 菌液涂布于SOC/Amp plate。置37℃培養16~20 h。
9) 觀察plate 上菌落的形狀并計算菌落數。

會員登錄

×

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標簽最多10個字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復您~
在線留言
主站蜘蛛池模板: 欧美特级特黄a大片免费 | 香港经典a毛片免费观看爽爽影院 | 免黄网站| 九九精品久久 | 国产视频一区二区在线观看 | 毛片一级黄色 | 日韩欧美一区二区三区免费观看 | 麻豆一区二区大豆行情 | 成人中文字幕在线观看 | 一级片视频免费观看 | 第一页在线 | 香港经典三级成人xxx | 涩色影院| 福利在线网址 | 91精品国产免费网站 | 国产精品青青 | 深夜在线网站 | 网站色| 波多野结衣在线免费观看视频 | 国产成a人片在线观看视频99 | 色天天躁夜夜躁天干天干 | 国产成人短视频 | 色迷迷网免费站视频在线观看 | 中国女人一级毛片 | 国产免费理论片在线观看 | 玖玖在线播放 | 在线观看亚洲天堂 | 性欧美暴力猛交xxxxx高清 | 午夜爽 | 精品在线观看国产 | 看看的在线视频国产 | 成人毛片免费观看 | 粉嫩极品国产在线播放 | 99精彩视频| 日韩在线aⅴ免费视频 | 色老妇 | 狠狠色狠狠色综合日日五 | 欧美日韩在线观看一区二区 | 日本成人在线播放 | 欧美成人免费做真爱大片 | 亚洲国产欧美在线不卡中文 |