有時(shí)，細(xì)胞就是那么少，但又要開(kāi)展多項(xiàng)分析，著實(shí)讓人為難。丹麥哥本哈根大學(xué)的研究人員開(kāi)發(fā)出一種新方法，能從微量的樣本中同時(shí)提取mRNA和天然蛋白。這項(xiàng)成果發(fā)表在《BioTechniques》5月刊上。
在生物學(xué)研究的許多領(lǐng)域，樣本量往往很有限，特別是人體細(xì)胞和組織，如卵泡和胚胎干細(xì)胞。但是，研究人員經(jīng)常需要開(kāi)展多項(xiàng)分析，比如基因表達(dá)和蛋白分析。這就需要從同一個(gè)樣本中分離出RNA和蛋白質(zhì)。不過(guò)，樣本本來(lái)就很少，分成兩份來(lái)操作更是不可能。
目前已有一些操作方案，能從少量樣本中同時(shí)提取出DNA、RNA和蛋白質(zhì)。然而，大部分方法都需要將蛋白質(zhì)變性，以保護(hù)RNA不受降解，這就使得一些需要天然蛋白的分析無(wú)法開(kāi)展，比如酶活分析、非變性PAGE或免疫共沉淀。
一種新方法，能從含有少量細(xì)胞的樣本中同時(shí)純化mRNA和天然蛋白。這種方法改良自現(xiàn)有的變性磁珠oligo-dT方案，在天然狀態(tài)下分離mRNA和蛋白質(zhì)，同時(shí)在4°C且還原劑存在時(shí)開(kāi)展RNA分離，以減少RNA的降解。
他們采用Dynabeads® Oligo (dT)25磁珠來(lái)選擇性分離mRNA，同時(shí)以非離子型去污劑來(lái)取代離子型去污劑，以便更好地保護(hù)蛋白質(zhì)的天然狀態(tài)。因此，裂解液中仍含有活性的RNase，但通過(guò)將mRNA與磁珠雜交時(shí)的溫度降至4°C，可有效抑制RNase的活性，同時(shí)他們延長(zhǎng)了雜交時(shí)間。
研究人員在新生大鼠卵巢、人卵巢顆粒細(xì)胞（hGC）和人黃體（CL）上檢驗(yàn)了這種新方法。他們測(cè)定了抑制素α亞基（Inha）和兩個(gè)看家基因（Rpl32和Gapdh）的mRNA表達(dá)，并測(cè)定了磷酸二脂酶（PDE）、caspase-3和乳酸脫氫酶（LDH）的酶活以及GAPDH和β-actin的免疫沉淀。
結(jié)果表明，這種方法在分離RNA的數(shù)量和質(zhì)量上與現(xiàn)有的試劑盒相當(dāng)，同時(shí)保留了有功能的蛋白質(zhì)。他們也檢驗(yàn)了標(biāo)準(zhǔn)oligo-dT方案下的RNA產(chǎn)量，發(fā)現(xiàn)Inha 、Rpl32和Gapdh基因所獲得的Cq值沒(méi)有差異。此外，酶活檢測(cè)也發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)未受RNA純化的影響。
這種方法能從含有少量細(xì)胞的樣本中同時(shí)純化mRNA和天然蛋白。當(dāng)起始材料很少，或需要研究mRNA與蛋白活性的關(guān)聯(lián)時(shí)，這特別有用。