本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠胰島素受體α（ISR-α）水平。用純化的大鼠胰島素受體α（ISR-α）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入胰島素受體α（ISR-α），再與HRP標(biāo)記的胰島素受體α（ISR-α）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的胰島素受體α（ISR-α）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠胰島素受體α（ISR-α）濃度。

大鼠（ISR-α）ELISA試劑盒,胰島素受體α（ISR-α）試劑盒

操作步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

80 IU/L	5號標(biāo)準(zhǔn)品	150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
40 IU/L	4號標(biāo)準(zhǔn)品	150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
20 IU/L	3號標(biāo)準(zhǔn)品	150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
10 IU/L	2號標(biāo)準(zhǔn)品	150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
5 IU/L	1號標(biāo)準(zhǔn)品	150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

大鼠（ISR-α）ELISA試劑盒,胰島素受體α（ISR-α）試劑盒相關(guān)產(chǎn)品：

Anti-phospho-STAT6（pThr641）/FITC  熒光素標(biāo)記抗磷酸化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子6抗體IgG
Anti-phospho-Src（pTyr529）/FITC  熒光素標(biāo)記抗磷酸化Src原癌基因抗體IgG
Anti-phospho c-Raf/RAF1（pSer338/pTyr340）/FITC  熒光素標(biāo)記抗磷酸化原癌基因c-raf抗體IgG
Anti-phospho C-Myc（pThr58/pSer62）/FITC  熒光素標(biāo)記抗磷酸化致癌基因C-Myc抗體IgG
Anti-phospho C-Met/pHGFR（pTyr1365）/FITC  熒光素標(biāo)記抗磷酸化原癌基因c-Met抗體IgG
Anti-phospho-c-Jun/AP-1（pThr91/pThr93）/FITC  熒光素標(biāo)記抗磷酸化原癌基因c-Jun抗體IgG
Anti-phospho-MEK1/MAPKK1（pSer298）/FITC  熒光素標(biāo)記抗磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶1抗體IgG
Anti-phospho Histone H1,4（pSer27）/FITC  熒光素標(biāo)記抗磷酸化組蛋白H1,4樣蛋白抗體IgG
Anti-phospho c-kit/SCFR/CD117（pTyr936）FITC  熒光素標(biāo)記抗磷酸化原癌基因c-kit抗體IgG
Anti-P-HP1/FITC  熒光素標(biāo)記抗異染色質(zhì)蛋白1磷酸化抗體（果蠅）IgG
Anti-P-HP1/FITC  熒光素標(biāo)記抗異染色質(zhì)蛋白1磷酸化抗體（果蠅）IgG
Anti-PI3K/P85 alpha/FITC  熒光素標(biāo)記磷脂酰肌醇激酶抗體IgG
Anti-PIBF/FITC  熒光素標(biāo)記孕激素誘導(dǎo)阻斷因子抗體IgG

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大鼠（ISR-α）ELISA試劑盒,胰島素受體α（ISR-α）試劑盒

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