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MEF細胞,小鼠胚胎成纖維細胞

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更新時間:2017-01-28 08:15:09瀏覽次數:500次

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產品名稱:MEF細胞,小鼠胚胎成纖維細胞 

產品用途:科研
保證運輸中細胞的正常生長,關于其價格、報價、貨期,請咨詢我們。
產品特點:活性好、存活率高、實驗成果特征明顯
產品來源:人組織、小鼠組織、大鼠組織、兔組織等動物組織
產品運輸:免費快遞
產品包裝:瓶裝
產品用途:細胞培養研究
下面是有關細胞株,菌株培養的具體無菌技術:
1. 實驗進行前,無菌室及無菌操作臺(laminar flow) 以紫外燈照射30-60 分鐘滅菌,以70 % ethanol 擦拭無菌操作臺面,并開啟無菌操作臺風扇運轉10 分鐘后,才開始實驗操作。每次操作只處理一株細胞株,且即使培養基相同亦不共享培養基,以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢后,將實驗物品帶出工作臺,以70 % ethanol 擦拭無菌操作臺面。操作間隔應讓無菌操作臺運轉10分鐘以上后,再進行下一個細胞株的操作。
2. 無菌操作工作區域應保持清潔及寬敞,必要物品,例如試管架、吸管、吸取器或吸管盒等可以暫時放置,其它實驗用品用完即應移出,以利于氣流之流通。實驗用品以70 % ethanol 擦拭后才帶入無菌操作臺內。實驗操作應在臺面的*無菌區域,勿在邊緣的非無菌區域操作。
3. 小心取用無菌的實驗物品,避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或容器瓶口,亦不要在打開的容器正上方操作實驗。容器打開后,以手夾住瓶蓋并握住瓶身,傾斜約45° 角取用,盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。
4. 工作人員應注意自身的安全,須穿戴實驗衣及手套后才進行實驗。對于來自人類或是病毒感染的細胞株應特別小心操作,并選擇適當等級的無菌操作臺(至少Class II)。操作過程中,應避免引起aerosol 的產生,小心毒性藥品,例如DMSO 及TPA 等,并避免尖銳針頭的傷害等。
5. 定期檢測下列項目:
5.1. CO2 鋼瓶的CO2 壓力
5.2. CO2 培養箱的CO2 濃度、溫度、及水盤是否有污染(水盤的水用無菌水,每周更換)。
5.3. 無菌操作臺內的airflow 壓力,定期更換紫外線燈管及HEPA 過濾膜,預濾網(300小時/預濾網,3000 小時/HEPA)。
6. 水槽可添加消毒劑(Zephrin 1:750),定期更換水槽的水。

MEF細胞,小鼠胚胎成纖維細胞傳代方法:細胞*匯合時,倒掉舊液,加入消化液(0.25%*+0.03%EDTA)2ml消化,顯微鏡下觀察細胞*脫離瓶壁分離成單個細胞后棄掉*,加培養基混勻分瓶,T25瓶中加培養基至6-8ml,T75瓶加培養基至20ml,37℃,5%CO2孵箱培養。
郵購備注: 收到細胞后,請鏡下觀察細胞,用恰當方式處理細胞。若有懸浮的細胞,請離心收集細胞,接種到一個新的培養瓶中。使用新鮮配制的培養基,使用進口胎牛血清,剛接到細胞時血清濃度可以在15%。本產品經過了細菌、真菌、霉菌、病毒(HIV、HBV、HCV)、支原體檢測。
我們將為客服提供全面的細胞計數、細胞染色、(MTT)比色法、細胞培養、細胞污染、常規生物材料細胞毒性實驗等等細胞實驗技術服務。
細胞復蘇的原則-快速融化:必須將凍存在-196℃液氮中的細胞快速融化至37℃,使細胞外凍存時的冰晶迅速融化,避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結晶,對細胞造成損害。
具體操作 (一)實驗前準備: 1.將水浴鍋預熱至37℃ 2.用75%酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺臺面。 3.在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養瓶等等。
(二)取出凍存管: 1.根據細胞凍存記錄按標簽找到所需細胞的編號。 2.從液氮罐中取出細胞盒,取出所需的細胞,同時核對管外的編號。
(三)迅速解凍: 1.迅速將凍存管投入到已經預熱的水浴鍋中迅速解凍,并要不斷的搖動,使管中的液體迅速融化。 2.約1-2min后凍存管內液體*溶解,取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁,再拿入超凈臺內。
(四)平衡離心:用架盤天平平衡后,放入離心機中3000r/min 離心3min。
(五)制備細胞懸液: 1.吸棄上清液。 2.向離心管內加入10ml培養液,吹打制成細胞懸液。 (六)細胞計數: 細胞濃度以5×105/ml為宜。
(七)培養細胞 將復合細胞計數要求的細胞懸液分裝入培養瓶內,將培養瓶放入37℃和5%CO2的培養箱內2-4小時(或者24-48小時)后換液繼續培養培養,換液的時間由細胞情況而定。
初學者易犯錯誤: 1.水浴鍋未預熱或者未預熱到37℃。 2.水浴鍋內凍存管太多,導致傳熱不佳,使融化時間延長。 3.離心前忘記平衡,導致離心機損壞和細胞丟失。 4.一次復蘇細胞過多,忘記更換吸頭和吸管,導致細胞交叉污染。
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