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小鼠ELISA試劑盒骨髓嗜多細胞微核的測定方法

時間:2015/1/21閱讀:695
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目前國內(nèi)外已把微核測試用于輻射損傷、化學(xué)誘變劑、新藥試驗、染色體遺傳疾病及癌癥前期診斷等各方面。

   嗜多染紅細胞是分裂后期的紅細胞由幼年發(fā)展為成熟紅細胞的一個階段,此時紅細胞的主核已排出,因胞質(zhì)內(nèi)含有核糖體,Giemsa染色呈灰藍色,成熟紅細胞的核糖體已消失,被染成淡橘紅色。骨髓中嗜多染紅細胞數(shù)量充足,由于無核,極易觀察到微核,因此,骨髓中嗜多染紅細胞成為微核試驗的細胞群。

實驗對象

   成年健康小鼠,體重25g左右,雌雄均可。

實驗試劑與器材

1)器材:顯微鏡、低速離心機、電子天平、解剖器械(搪瓷解剖盤、探針、剪刀、鑷子)、注射器、試管、試管架、磨口試劑瓶、滴管、染色缸、洗耳球、量筒、清潔載玻片。

2)試劑:0.9%生理鹽水、滅活的小牛血清、*、甲醇、PBS (pH6.8)Giemsa染液、瑞氏染液。

4. 實驗方法與步驟

1)*處理:取骨髓前24h先給小鼠腹腔注入*,注射劑量為100mgkg動物體重。

2)取骨髓:用損傷脊髓法處死小鼠,然后用剪刀剪開大腿上的皮膚和肌肉,取出大腿骨,用一小塊紗布來回搓干凈附在骨上的肌肉碎渣。剪掉股骨兩端膨大的關(guān)節(jié)頭,然后用注射器吸取5ml生理鹽水,插入股骨一端,將骨髓細胞沖洗至10ml的離心管中。可重復(fù)沖洗多次,直至骨髓腔呈白色為止。

3)離心處理:將所獲得的細胞懸浮液以 1000rpm離心10min,吸去上清液,在沉淀物中加入2滴滅活的小牛血清,制成細胞懸液。

4)涂片:滴一滴懸液于載玻片一端,按常規(guī)方法涂片,在空氣中晾干。

5)固定:將晾干的載玻片放入甲醇固定液中10min,取出晾干。

6)染色:將制片平放在玻璃板上,用1910 GiemsaPBS∶瑞氏染液,染色15min,流水沖洗后晾干即可鏡檢。

7)觀察:嗜多染紅細胞為年幼紅細胞,呈灰藍色,略大于紅細胞(紅色),微核多呈圓形和橢圓形,呈藍紫色或紫紅色(圖13-3)。

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