ELISA試劑盒的組成:
ELISA應用的抗原要求有較高的特異性、親和力和純度。主要有3類,即自然抗原、人工合成抗原和基因重組抗原。自然抗原的純度不高,特異性不強;合成抗原一般為多肽片段,缺乏天然抗原所具有的立體結構表位,親和力不高,可能導致相應表位的抗體漏檢;基因重組抗原具有安全、特異性強、親和力高、產量大等特點,是一種比較理想的抗原,但其純化比較困難。
在ELISA試劑盒中酶作用于底物后生成有色物質、熒光物質或導致化學發光,分別可用分光光度計、熒光光度計測量及照度計測量。熒光和化學發光測定的敏感度均高于比色測定,標準曲線的線性范圍亦較比色反應寬,測定效果優于常用的比色ELISA。
包被將免疫活性物質(抗原或抗體)結合于固相載體上的過程稱為包被。常用的材料有聚苯乙烯、硝酸纖維薄膜等;常用的方法有吸附法、化學交聯法及親和素-*間接包被法,特別是后一方法,效率高,酶聯免疫檢測試劑盒而且可用以包被不易吸附在固相上的各種免疫活性物質。具體做法是先將鏈霉親和素包被在固相載體上,然后使與*化的抗原或抗體與之結合。由于親和素與*之間的高親和力,抗原或抗體即間接結合在親和素包被的固相上。
臨床檢驗的ELISA主要幾種類型:
1 雙抗體夾心法測抗原:
雙抗體夾心法是檢測抗原zui常用的方法,操作步驟如下:
1)將特異性抗體與固相載體聯結,形成固相抗體。洗滌除去未結合的抗體及雜質。
2)加受檢標本,保溫反應。標本中的抗原與固相抗體結合,形成固相抗原抗體復合物。 洗滌除去其他未結合物質。
3)加酶標抗體,保溫反應。固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。*洗滌未結合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢抗原的量相關。
4)加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產物。通過比色,測知標本中抗原的量。
2 雙抗原夾心法測抗體 :
反應模式與雙抗體夾心法類似。用特異性抗原進行包被和制備酶結合物,以檢測相應的抗體。與間接法測抗體的不同之處為以酶標抗原代替酶標抗抗體。此法中受檢標本不需稀釋,可直接用于測定,因此其敏感度相對高于間接法。乙肝標志物中抗HBs的檢測常采用本法。本法關鍵在于酶標抗原的制備,應根據抗原結構的不同,尋找合適的標記方法。
3 間接法測抗體:
間接法是檢測抗體常用的方法。其原理為利用酶標記的抗抗體(抗*抗體)以檢測與固相抗原結合的受檢抗體,故稱為間接法。
操作步驟如下:
1)將特異性抗原與固相載體聯結,形成固相抗原。洗滌除去未結合的抗原及雜質。
2)加稀釋的受檢血清,保溫反應。血清中的特異抗體與固相抗原結合,形成固相抗原抗體復合物。經洗滌后,固相載體上只留下特異性抗體,血清中的其他成份在洗滌過程中被洗去。
3)加酶標抗抗體。可用酶標抗人Ig以檢測總抗體,但一般多用酶標抗人IgG檢測IgG抗體。固相免疫復合物中的抗體與酶標抗體抗體結合,從而間接地標記上酶。洗滌后,固相載體上的酶量與標本中受檢抗體的量正相關。
4)加底物顯色。本法主要用于對病原體抗體的檢測而進行傳染病的診斷。間接法的優點是只要變換包被抗原就可利用同一酶標抗抗體建立檢測相應抗體的方法。
ELISA試劑盒種類:
標本:血清、血漿、細胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等。
種屬:人、大鼠、小鼠、豚鼠、倉鼠、裸鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛、羊、雞、鴨、魚等。