小鼠Mo-MuLv感染的3T3細胞 , Mo-MuLV/3T3細胞5×10^5以上/1ml
對于大多數細胞研究工作者來說，小鼠Mo-MuLv感染的3T3細胞 , Mo-MuLV/3T3細胞污染那可是個糟糕的事情，也是比較容易出現的情況，我們如何防范，如何避免，是我們要學習和掌握的。
Restr.-Endonucl. Sna BI 200 U （10 U/µl）
Restr.-Endonucl. Ssp I 1,000 U （10 U/µl）
Restr.-Endonucl. Alu I, 500U 500 U （10 U/µl）
SuRE/Cut Buffer M 5 x 1 ml
小鼠Mo-MuLv感染的3T3細胞 , Mo-MuLV/3T3細胞Restr.-Endonucl. Nar I 1,000 U （10 U/µl）
RNA, 16S- and 23S-Ribosomal 1 ml （100 A260 units）
Restr.-Endonucl. Sfu I 2,000 U （10 U/µl）
b-Glucuronidase/Arylsulfatase, 10 ml
Nucleoside Monophosphate Kinas 10 mg （60 mg lyo.）
DNA MW-Marker IV 50 µg （1 A260 unit）
 下面我們對細胞培養中常見的污染情況，做個總結：
1）原蟲：培養液可輕微渾濁，顯微鏡下那些細小的點狀物數量非常多，輕微活動，細胞雖然可以生長但繁殖速度卻明顯減慢，而且細胞狀態不好，邊緣不清楚，細胞不透亮。他們與細胞可共生但會與細胞爭奪營養。這種共生是非常普遍的，但他們的數量小，細胞站優勢所以不會影響到細胞的正常生長，只有當他們到達一定的數量時就會影響到細胞的生長，zui終形成惡性循環。
2）霉菌：培養液是清亮的，倒置顯微鏡下無雜質，37度孵箱培養2-3天，仍清亮，但出現絮狀雜質，鏡下可見呈細絲狀的團狀漂浮物，可看到明顯的菌絲，細胞仍可生長，但時間長之后，細胞的活力狀態變差，用硫酸銅溶液擦拭CO2孵箱內，再把水盤里也加上飽和量的硫酸銅。或者在培養箱的托盤加入飽和的消毒*高鹽液體,可以防止霉菌污染。CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有細胞暫時轉移，采用過氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。并把過氧乙酸放置在孵箱內一個小時，使其蒸汽彌漫。待過氧乙酸的氣味消散后，再移入細胞。孵箱應定期清潔（2月左右），尤其在多雨的季節。其它培養箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外燈照。預防霉菌污染，可在培養基里加3u/ml的兩性霉素或*或*或雙抗；但細胞一旦污染，很難挽救，*或*或雙抗都于事無補，建議舍棄該污染細胞。，將環境*消毒，如果所有細胞都污染，可能是系統污染，檢查一下培養基和器材，如果只是個別污染，可能是操作問題，就要注意操作。
3）細菌：細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀，根據感染細菌的不同，可有不同的外形，培養液一般會渾濁變黃，對細胞生長影響明顯。仔細檢查一下器皿的滅菌情況，是否在高壓滅菌時放氣時間足夠，壓力足夠！尤其是和儲存培養液接觸的移液管等物品，連續兩次污染的話有可能造成儲存液污染，一定要注意！下次使用前檢查一下培養液是否存在渾濁的現象！ 可在培養液中加相應的抗生素處理
4）黑蛟蟲：可以穿透濾膜，也可以通過空氣傳播，低倍下為黑色點狀，高倍下可看見黑色的小蟲游來游去，培養液也是不渾的，一般不會太影響，細胞還是可以用的。常常是細胞生長狀態良好，且觀測到的運動物無明顯增多，且培養液顏色、透明度無明顯變化，可在同一批號的血清養的細胞中發現類似現象。對細胞生長狀態不會有明顯影響，在細胞增殖旺盛之后會自然消失，除更換血清外無須特殊處理。建議如果細胞有可能是此種污染的話，可以增加細胞的種板密度，以提高細胞的生存率。
5）真菌：一般培養液清亮，不變色，鏡下有絲狀物，有些真菌開始很像死細胞碎片，只是它很多很多的小塊很清楚，象珊瑚狀，不象細胞碎片分不清，慢慢的會長出很細的黑色絲狀物。真菌生長的比較慢，不象細菌那么容易被發現，但是一旦發現有它的存在細胞就被污染了，也很難救活了。
6）支原體：黑色的，好象多為多形，培養液一般培養液一般會渾濁，原體感染，國內血清很多都沒有做支原體陰性檢測，而支原體是牛血清中zui常見的微生物之一。而且它不能用過濾的辦法除去。支原體感染細胞以后，細胞病變不很明顯，只是慢慢死去。用泰樂菌素，獸用支原體病的藥，但可用于細胞培養，無任何不良反應。Sigma公司的使用時用50ug/ml Tylosin培養液培養6天或連續傳兩代即可清除支原體污染。如果作為常用的抗生素的話, 建議用8ug/ml的濃度。
污染的可能原因：可能原因很多比如配液消毒問題、操作問題、環境問題等等關于培養基的無菌狀況，取培養基至培養瓶中（不加細胞），37度試培養一段時間后觀察。如果沒有細菌生長就是操作的問題。 也可以在培養基中事先加入雙抗（*和氨芐*）。但雙抗有時會影響細胞的狀態，所以在做轉染、檢測細胞某項指標前一定要撤去雙抗，以避免影響實驗結果。1、孵箱應定期用三氧機消毒或者 紫外光照射，并用酒精和新潔爾滅試擦孵箱同時孵箱內的水應是三蒸水2、超凈臺\取材\器材\培養液\培養瓶\操作等因素3、超凈臺的風機不能過大，風機到6-8格。否則也可能能致霉菌污染4、無菌室經甲醛熏蒸消毒后，可用同等量的氨水噴灑中和，約幾小時即可進入操作。
Anti-His6-Peroxidase （2） 80 U
Pwo SuperYield DNA Polymerase 100 U
Reverse Transcriptase AMV, 500 500 U
First Strand cDNA Synt. Kit fo 1 kit （30 reactions）
Collagenase H, 2.5g, non-steri 2.5 g
Deoxynucleoside triphosphate S 4 x 10 µmol （4 x 100 µl）
Taq DNA Polymerase,5units/Ál（4 1,000 U （4 x 250 U）
Taq DNA Polymerase,1unit/Ál （4 1,000 U （4 x 250 U）
Restr.-Endonucl. Hpa I, 100 u 100 U （3 - 10 U/µl）
Taq DNA Polym., 5 units/Ál （10 2,500 U （10 x 250 U）
Protease Inhibitors Set 1 set
HP PCR Product Purification Ki 1 kit （50 purifications）
TRIPURE ISOLATION REAGENT 200 200 ml
PVDF Western Blotting Membrane 1 roll （30 cm x 3.00 m）
FastStart HiFi PCR System dNTP 125 U
TriPure Isolation Reagent, 50 50 ml
FastStart Taq DNA Polymerase, 100 U
Restr.-Endonucl. Bse AI 200 U （10 U/µl）
Restr.-Endonucl. Mlu I, 500 u 500 U （10 U/µl）
SuRE/Cut Buffer L 5 x 1 ml
b-Glucuronidase/Arylsulfatase, 2 ml
FastStart Taq DNA Pol. dNTPack 100 U
Restr.-Endonucl. Cfo I （Hha I） 1,000 U （10 U/µl）
RNA/DNA Stabil.-Reag.Blood/Bon 500 ml