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滬鼎生物教您凍存的原代細胞應(yīng)該如何培養(yǎng)?

時間:2021/5/12閱讀:813
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  原代細胞(primary culture cell)是指從機體取出后立即培養(yǎng)的細胞。有人把培養(yǎng)的第1代細胞與傳10代以內(nèi)的細胞統(tǒng)稱為原代細胞培養(yǎng)。原代細胞不僅廣泛應(yīng)用于分子、細胞生物學(xué)和生物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究,如蛋白質(zhì)組學(xué)、基因組學(xué)、細胞株(系)研究、DNA,RNA和遺傳學(xué)研究等。

一、凍存原代細胞的培養(yǎng)

1.將一管細胞從液氮罐中取出,注意保護手和眼睛。

2.將凍存管快速的放入37℃水浴中,輕輕握住并旋轉(zhuǎn),直到管內(nèi)物體*融化。

3.將凍存管立即從水浴中拿出,擦干,轉(zhuǎn)入無菌環(huán)境。

4.用70%的酒精沖洗凍存管,然后擦去多余酒精。

5.打開蓋子,注意手指不要碰到里面的螺紋(注意,由于凍存管有負壓,開蓋時可能會有少量溢出,這是正常現(xiàn)象)。

6.用多聚賴氨酸包被培養(yǎng)瓶。多數(shù)細胞推薦的接種密度為每平方厘米5000個細胞。

7.蓋好培養(yǎng)瓶的蓋子,輕輕搖晃培養(yǎng)瓶以使細胞分布均勻。若需要氣體交換可打開蓋子。

8.將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱中。

9.放入培養(yǎng)箱后第6-16小時更換一次培養(yǎng)基,以去除殘留的二甲基亞楓和未貼壁的細胞。 


二、原代細胞的組織塊培養(yǎng)法:

1.組織塊接種后的前3天,在觀察和移動的過程中,注意不要引起液體的振蕩。要避免經(jīng)常翻動和振動,否則組織塊不易附著于瓶壁上或附著后也會脫落飄起。

2.加入的培養(yǎng)液不宜過多,避免浸泡的組織塊受輕微的波動而脫落下來。

3.當(dāng)細胞向外遷徙出來后要注意記錄并去除漂浮的組織塊和殘留的細胞,它們產(chǎn)生的有毒物質(zhì)會影響原代細胞的生長。

4.為促進組織塊盡快粘貼在培養(yǎng)瓶皿上,可以在種植前先將膠原薄層涂在培養(yǎng)瓶底壁上。

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