ELISA必須遵守以下3個核心原理：
1）抗原或抗體能吸附于固相載體表面，并保持其免疫學活性；
2）抗原或抗體可通過共價鍵與酶連接形成酶結合物，而此種酶結合物仍能保持其免疫學和酶學活性；
3）酶結合物與相應抗原或抗體結合后，可根據(jù)加入底物的顏色反應來判定是否有免疫反應的存在，而且顏色反應的深淺是與標本中相應抗原或抗體的量成正比例的，可根據(jù)已知濃度的抗原或抗體的顏色反應的深淺繪制標準曲線并依此計算出未知樣品中抗體或抗原的濃度。在ELISA中酶起到很關鍵的作用，常用于ELISA法的酶有辣根過氧化物酶，堿性磷酸酯酶等，其中尤以辣根過氧化物酶為多。酶結合物是酶與抗體或抗原, 半抗原在交聯(lián)劑作用下聯(lián)結的產(chǎn)物,它不僅具有抗體抗原特異的免疫反應，還能催化酶促反應，顯示出生物放大作用。
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