CCL25,豚鼠趨化因子配體25ELISA試劑盒原理

l 本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關液體樣本中豚鼠趨化因子配體25（CCL25）的含量。

l 有效期：6個月

l 保存條件：2-8℃

l 本試劑盒僅供體外研究使用，不用于臨床診斷

實驗原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被豚鼠趨化因子配體25（CCL25）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的豚鼠趨化因子配體25（CCL25）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

二、ELISA檢測概述

      ELISA（酶聯接免疫吸附反應分析）是以免疫學反應為基礎，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結合起來的一種敏感性很高的實驗技術。 由于抗原、抗體的反應在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應物，從而保證試驗結果的特異性與穩定性。

      實際應用中，通過不同的設計，具體的方法步驟可有多種。即：用于檢測抗體的間接法、用于檢測抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。目前我們對客戶提供比較常用的ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法服務。

三、技術流程

雙抗體夾心法(檢測未知抗原) 間接法(檢測未知抗體)

1、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應孔中加0.1ml，4℃ guoye。次日，棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗3次。

2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應孔中，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌(同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔)。

3、加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.05ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。

4、加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。

5、終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml

6、結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對照孔調零后測各孔OD值，若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。 1、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1-10ug/ml， 每孔加0.1ml，4℃guoye。次日洗滌3次。

2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.05ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)

3、加酶標抗體：于反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.05ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,zui后一遍用DDW洗滌。

4、加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。

5、終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml

6、結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對照孔調零后測各孔OD值，若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。

四、客戶須知

1、液體類標本（細胞培養上清、組織勻漿、血清、血漿、尿液、胸水、腹水、腦脊液等）；

2、樣本保存：請盡早檢測，2-8℃保存一天；需更長時間須冷凍（-20℃或-70℃）保存。如需周期收集樣本，請將樣本及時分裝標號后，置-20℃或-70℃保存；

3、請提前告訴我們：您樣本的種屬、樣本數量、待測指標及其他特殊要求。

五、報告內容及標準

1、ELISA標準曲線；

2、詳細的實驗步驟；

3、完整的實驗報告（試劑耗材，實驗方法，實驗結果及結果說明）；

4、實驗進行階段，我公司客服人員會及時向您匯報實驗進程。

不斷提升服務質量，精益求精，“真誠的服務”是我司永恒的主題。

六、服務參考

售前服務

產品介紹，技術疑難解答

售中服務

1.守信合同，保證及時供貨，隨時保持與客戶

售后服務

1.對用戶所有疑問，快速做出反映，售后服務人員在2~3個工作日內給您一個滿意的答復。

2.產品如有質量問題，實行包退、包換服務。