ELISA試劑盒實驗陽性斷定值（cut-off value）通常為陰性對照A值加上一個特定的常數，以此作為判別成果陽性或陰性的規范。
用此法判別成果請求實驗條件十分穩定，試劑的制備有必要規范化，陽性和陰性的對照品應契合一定的規范，須配用精密的儀器，并嚴厲按規定操作。
陽性斷定值公式中的常數是在這特定的體系中經過對很多標本的實驗檢查而得到的。
ELISA試劑盒現舉某種檢查HBsAg的試劑盒為例。
平均數（PCX），兩個平均數的差（P-N）有必要大于一個特定的數值（例0.400），實驗才有用。
3個陰性對照A值均應≥0.5×NCX，并≤1.5×NCX，如其中之一超出此規模，則棄去，而已另兩個陰性對照從頭核算NCX；如有兩個陰性對照A值超出以上規模，則該次實驗無效。
應留意的是，式中0.05為該試劑盒的常數，只適合于該特定條件下，而不是對各種試劑均可通用。
根據以上敘說能夠看出，在這種方法中陰性對照和陽性對照也起到實驗的質控效果，試劑蛻變和操作不妥均會發生"實驗無效"的后果。
標本/陰性對照比值
在實驗條件（包含試劑）較難確保穩定的情況下，ELISA試劑盒這種判別法較為適宜。
在得出標本（S）和陰性對照（N）的A值后，核算S/N值。也有寫作P/N的，這兒的P不代表陽性（positive），而是患者（patient）的縮寫，不該誤解。為防止混淆，更宜用S/N表明。
ELISA試劑盒陽性斷定值按下式核算：陽性斷定值=NCX+0.05，標本A值＞陽性斷定值的為陽性，小于陽性斷定值的為陰性。
在競賽法ELISA中，陰性孔呈色深于陽性孔。陰性呈色的強度取決于反響中酶結合物的濃度和參加競賽按捺物的量，通常調節陰性對照的吸光度在1.0-1.5之間，此刻反響zui為敏感。
競賽法ELISA不易用自視判別成果，因肉眼很難區分弱陽性反響與陰性對照的顯色區別，通常均用比色計測定，讀出S、P和N的吸光值。
核算方法首要也有兩種，即陽性斷定值法和按捺率法。
陽性斷定值法
與間接法和夾心法中的陽性斷定值法根本一樣，ELISA試劑盒但在核算公式中引進陽性對照A值，現舉某種檢查抗HBc的試劑盒為例。
試劑盒中的陰性對照為不含抗HBc的復鈣人血漿，陽性對照中抗HBc含量為125±100u/ml。
每次實驗設2個陽性對照和3個陰性對照。測得A值后，先核算陰性對照A值的平均值（NCX）和陽性對照A值的平均數（PCX），兩個平均數的差（N-P）有必要大于一個特定的數值（例如0.300）,實驗才有用。
3個陰性對照A值均應小于2.000，并且應≥0.5×NCX并≤1.5×NCX，如其中之一超出此規模，則棄去，而以另2個陰性對照從頭核算×NCX；如有2個陰性對照A超出以上規模，則該次實驗無效。
ELISA試劑盒陽性斷定值按下式核算：陰性斷定值=0.4×NCX+0.6×PCX，標本A值≤陽性斷定值的反響為陽性，A＞陽性斷定值的反響為陰性。
