ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性斷定值（cut-off value）通常為陰性對(duì)照A值加上一個(gè)特定的常數(shù)，以此作為判別成果陽(yáng)性或陰性的規(guī)范。
用此法判別成果請(qǐng)求實(shí)驗(yàn)條件十分穩(wěn)定，試劑的制備有必要規(guī)范化，陽(yáng)性和陰性的對(duì)照品應(yīng)契合一定的規(guī)范，須配用精密的儀器，并嚴(yán)厲按規(guī)定操作。
陽(yáng)性斷定值公式中的常數(shù)是在這特定的體系中經(jīng)過(guò)對(duì)很多標(biāo)本的實(shí)驗(yàn)檢查而得到的。
ELISA試劑盒現(xiàn)舉某種檢查HBsAg的試劑盒為例。
平均數(shù)（PCX），兩個(gè)平均數(shù)的差（P-N）有必要大于一個(gè)特定的數(shù)值（例0.400），實(shí)驗(yàn)才有用。
3個(gè)陰性對(duì)照A值均應(yīng)≥0.5×NCX，并≤1.5×NCX，如其中之一超出此規(guī)模，則棄去，而已另兩個(gè)陰性對(duì)照從頭核算NCX；如有兩個(gè)陰性對(duì)照A值超出以上規(guī)模，則該次實(shí)驗(yàn)無(wú)效。
應(yīng)留意的是，式中0.05為該試劑盒的常數(shù)，只適合于該特定條件下，而不是對(duì)各種試劑均可通用。
根據(jù)以上敘說(shuō)能夠看出，在這種方法中陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照也起到實(shí)驗(yàn)的質(zhì)控效果，試劑蛻變和操作不妥均會(huì)發(fā)生"實(shí)驗(yàn)無(wú)效"的后果。
標(biāo)本/陰性對(duì)照比值
在實(shí)驗(yàn)條件（包含試劑）較難確保穩(wěn)定的情況下，ELISA試劑盒這種判別法較為適宜。
在得出標(biāo)本（S）和陰性對(duì)照（N）的A值后，核算S/N值。也有寫作P/N的，這兒的P不代表陽(yáng)性（positive），而是患者（patient）的縮寫，不該誤解。為防止混淆，更宜用S/N表明。
ELISA試劑盒陽(yáng)性斷定值按下式核算：陽(yáng)性斷定值=NCX+0.05，標(biāo)本A值＞陽(yáng)性斷定值的為陽(yáng)性，小于陽(yáng)性斷定值的為陰性。
在競(jìng)賽法ELISA中，陰性孔呈色深于陽(yáng)性孔。陰性呈色的強(qiáng)度取決于反響中酶結(jié)合物的濃度和參加競(jìng)賽按捺物的量，通常調(diào)節(jié)陰性對(duì)照的吸光度在1.0-1.5之間，此刻反響zui為敏感。
競(jìng)賽法ELISA不易用自視判別成果，因肉眼很難區(qū)分弱陽(yáng)性反響與陰性對(duì)照的顯色區(qū)別，通常均用比色計(jì)測(cè)定，讀出S、P和N的吸光值。
核算方法首要也有兩種，即陽(yáng)性斷定值法和按捺率法。
陽(yáng)性斷定值法
與間接法和夾心法中的陽(yáng)性斷定值法根本一樣，ELISA試劑盒但在核算公式中引進(jìn)陽(yáng)性對(duì)照A值，現(xiàn)舉某種檢查抗HBc的試劑盒為例。
試劑盒中的陰性對(duì)照為不含抗HBc的復(fù)鈣人血漿，陽(yáng)性對(duì)照中抗HBc含量為125±100u/ml。
每次實(shí)驗(yàn)設(shè)2個(gè)陽(yáng)性對(duì)照和3個(gè)陰性對(duì)照。測(cè)得A值后，先核算陰性對(duì)照A值的平均值（NCX）和陽(yáng)性對(duì)照A值的平均數(shù)（PCX），兩個(gè)平均數(shù)的差（N-P）有必要大于一個(gè)特定的數(shù)值（例如0.300）,實(shí)驗(yàn)才有用。
3個(gè)陰性對(duì)照A值均應(yīng)小于2.000，并且應(yīng)≥0.5×NCX并≤1.5×NCX，如其中之一超出此規(guī)模，則棄去，而以另2個(gè)陰性對(duì)照從頭核算×NCX；如有2個(gè)陰性對(duì)照A超出以上規(guī)模，則該次實(shí)驗(yàn)無(wú)效。
ELISA試劑盒陽(yáng)性斷定值按下式核算：陰性斷定值=0.4×NCX+0.6×PCX，標(biāo)本A值≤陽(yáng)性斷定值的反響為陽(yáng)性，A＞陽(yáng)性斷定值的反響為陰性。
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