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技術文章

ELISA實驗中的重要因素:溫育

閱讀:265發(fā)布時間:2017-6-5

溫育是ELISA測定中影響測定勝敗zui為要害的一個因素。ELISA作為一種固相免疫測定,抗原抗體的反響在固相上進行,要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原*,必須在必定的溫度條件下反響必定的時刻。溫育所需時刻與溫度成反比,即溫度越高,則所需時刻相對較短。zui為常用的溫育溫度有37℃和室溫,其次是43℃和2~8℃。


溫育這一步是實驗ELISA測定中zui簡單出現(xiàn)疑問的過程。一般目前國內(nèi)ELISA產(chǎn)品試劑盒的反響溫育時刻為37℃ 30分鐘~1小時,進口ELISA試劑盒則一般為37℃ 1~2小時才干有較*的,低于1小時,也許會影響測定下限。因而,對于溫育,在實踐測定操作中必定要留意以下幾點:
要確保在設定的溫度下有滿足的反響時刻。一般來說,加完樣本和/或反響試劑后,將微孔板從室溫拿至水浴箱或溫箱中時,孔內(nèi)溫度從室溫升至37℃,需求必定的時刻,尤其是在室溫比較低以及非水浴的狀態(tài)下,這段升溫時刻也許還比較長,而在臨床實驗室中,很少有人留意這個疑問,一般是將微孔板一放入溫箱即開始 計時,這樣就很簡單形成實踐測定中溫育時刻不行,弱陽性樣本測不出來的疑問。


曾有一地處南邊的血站同行提出了一個疑問,就是在每一年的冬季總有那么一個多月的時刻,在做HBsAg測定的室內(nèi)質(zhì)控中,測定由衛(wèi)生部臨床查驗中心供給的1 ng/ml弱陽性樣本時,老是測不出來,不知原因為何?這也許就與南邊冬季室內(nèi)溫度較低有關,此刻微孔板轉(zhuǎn)入溫箱后37℃溫育時刻不行,致使弱陽性樣本測定為陰性。因而,為確保37℃下滿足的溫育時刻,臨床實驗室可自行確定本實驗室不一樣時節(jié)(不一樣室溫下)微孔板從室溫拿至溫箱后需求多長時刻孔內(nèi)溫度才干到達37℃,從而恰當延伸板條在溫箱中的放置時刻。詳細的做法是,用一小溫度計放置板孔反響溶液中丈量調(diào)查即可。

 


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