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人*α1酶聯免疫分析試劑盒使用說明書

閱讀:207發布時間:2017-10-25

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本試劑盒僅供研究使用。

使用目的:
本試劑盒用于測定人血清,血漿及相關液體樣本中*α1(Tα1)的含量。
人*α1酶聯免疫分析試劑盒使用說明書實驗原理
本試劑盒應用酶聯免疫競爭法測定標本中人*α1(Tα1)水平。用純化的人*α1(Tα1)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中加入*α1(Tα1),和HRP標記的*α1(Tα1)抗原,使它們競爭結合,,經過*洗滌后加底物TMB顯色。樣本顏色的深淺和樣品中的*α1(Tα1)的含量呈負相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人*α1(Tα1)的含量。  
試劑盒組成 

標本要求 
1.標本處理:(1)水樣   采集后經 -20℃反復凍融三次,再經玻璃纖維過濾后,備查
(2)組織   樣品用丁醇:甲醇:水(5:25:70 V:V:V)抽提,或按相關文獻提取進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,備查
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
人*α1酶聯免疫分析試劑盒使用說明書操作步驟

1.加樣:分別設標準孔、空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上標準孔中加50微升,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
2.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。   
4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
7.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
8.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

計算
  以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。 
注意事項
1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,*使用排槍加樣。
4.請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。
人*α1酶聯免疫分析試劑盒使用說明書檢測范圍:


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