ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)開(kāi)端前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫，試劑不能直接在37 溶解;試劑或樣品制作時(shí)，均需充分混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)猜測(cè)樣品含量，如樣品濃度過(guò)高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的查看規(guī)劃，核算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
反應(yīng)時(shí)間的控制：參與底物后請(qǐng)守時(shí)查詢反應(yīng)孔的顏色改變（比如，每隔10分鐘），如顏色較深，請(qǐng)?zhí)崆皡⑴c中止液中止反應(yīng)，避免反應(yīng)過(guò)強(qiáng)然后影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
棄去液體，甩干，不必洗刷。每孔加查看溶液A工作液100 （臨用前制作），酶標(biāo)板加上覆膜，37 溫育1小時(shí)。
棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400 /每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。
ELISA試劑盒加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液 100 ，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100 ，留心不要有氣泡，加樣 時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板底部，盡量不觸及孔壁，悄然晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37 溫育2小時(shí)。為確保實(shí)驗(yàn)效果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)運(yùn)用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
每孔加查看溶液B工作液（臨用前制作）100 ，加上覆膜，37 溫育1小時(shí)。
棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，辦法同進(jìn)程3。
每孔加底物溶液90 ，酶標(biāo)板加上覆膜37 避光顯色（反應(yīng)時(shí)間控制在15-30分鐘，當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色，后3-4孔梯度不明顯時(shí)，即可中止）。
每孔加中止溶液50 ，中止反應(yīng)，此刻藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。中止液的參與次第應(yīng)盡量與底物液的參與次第相同。
ELISA試劑盒當(dāng)即用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)丈量各孔的光密度（值）。
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