elisa試劑盒試驗*化包被條件
elisa試劑盒試驗*化包被條件
1.包被抗原的挑選
包被抗原可分為天然蛋白、重組蛋白和小分子抗原三大類.天然蛋白需經純化才能用直接吸附法包被,對于含雜質較多的抗原能夠選用直接捕獲法包被(先用能夠與目的抗原反響的物質如抗體直接吸附在酶標板上,再經過特異性反響使抗原固相化).經純化的重組蛋白通常皆可直接包板.小分子抗原比方多肽以及一些小分子有機化合物,由于分子量太小,通常難于直接吸附在酶標板上,通常都先使其與無關蛋白質如BSA等偶聯,偶聯物吸附于固相載體上.
2.包被液的挑選
通常常用的是pH9.6的碳酸鹽緩沖液,假如包被的抗原在堿性條件下不穩定的話,也能夠運用pH7.2的磷酸鹽緩沖液.
3.包被溫度的挑選
通常是4-8度條件下過夜或許37度保溫2小時,咱們強烈建議4-8度條件下包被,有利于蛋白活性的保持.
4.包被濃度的挑選
包被的zui適濃度隨固相載體和包被物的性質改變,通常蛋白質的包被濃度為1-5ug/ml,要明確對于特定包被抗原的zui適包被濃度需求經過試驗來確定.
包板后需求關閉嗎？應當挑選什么樣的關閉系統？
關閉是不是必要,取決于ELISA的形式及詳細的試驗條件.通常說來,雙抗體夾心法,只需酶符號物是高活性的,操作時洗刷*,不經關閉也可得到滿足的成果.而在直接法測定中,關閉通常是*的.
常用的關閉劑有0.05%-0.5%的BSA、10%的小牛血清、1%明膠、5%的脫脂奶粉,AbMART*運用5%脫脂奶粉,價廉而且關閉能力強,不過5%脫脂奶粉只合適短期內運用,不宜長時間保存,所以試劑盒中較少運用.
