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甘油三酯的提取

時間:2022/3/1閱讀:1436
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甘油三酯,它是長鏈脂肪酸和甘油形成的脂肪分子,也是人體內含量最多的脂類,大部分組織均可以利用甘油三酯分解產物供給能量,同時肝臟、脂肪等組織還可以進行甘油三酯的合成,在脂肪組織中貯存。它不僅是細胞膜的主要成分,也是重要的呼吸底物和供能物質,在脂肪酸運輸過程中具有重要作用。血清中內源性三酰甘油主要以VLDL的形式運輸,外源性三酰甘油主要以CM的形式運輸,甘油三酯含量的增高與動脈粥樣硬化性心血管疾病密切相關。

  
  甘油三酯經KOH皂化水解生成甘油及脂肪酸,過碘酸氧化甘油生成甲醛,在銨離子存在下甲醛能夠與乙酰丙酮縮合生成黃色物質,產物在420nm處具有特征吸收峰,通過吸光值的變化即可定量檢測甘油三酯的含量。
  
  甘油三酯(TG)的提取(可根據預實驗結果適當調整樣本量及比例)
  1、細菌或細胞:離心收集細菌或細胞至離心管內,按照細菌或細胞數量(10?個):試劑一體積(mL)為(500-1000):1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL試劑一)處理樣品,冰浴超聲破碎(功率20%或200W,超聲2s,間隔1s,總時間1min),4℃8000g離心10min,取上清待測。
  
  2、組織:按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為1:(5-10)的比例(建議稱取0.1g組織,加入1mL試劑一)處理樣品,冰浴勻漿,4℃8000g離心10min,取上清待測。
  
  3、血清(漿)、培養液等液體樣本:直接測定或適當稀釋后再進行測定。
  
  甘油三酯試劑盒先利用脂肪酶水解甘油三酯形成甘油和脂肪酸,然后利用雙酶聯反應系統將釋放出來的甘油用比色法檢測。是基于比色法來檢測血清和血漿里面的甘油三酯的含量,檢測的吸光度值在540nm處檢測,儲存條件是-20度,穩定期是6個月。


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