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測定原理:
蛋白質中的賴氨酸(lysine,Lys)具有一個游離的ε-NH2,它與茚三酮試劑反應生成藍紫色物質,其顏色的深淺在一定范圍內與賴氨酸的含量成線性關系。亮an酸與賴氨酸的碳原子數目相同,而且僅有—個游離氨基(ε-NH2),所以通常用亮an酸配制標準液。
賴氨酸含量計算:
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下:
標準條件下測定回歸方程為y = 0.0062x - 0.0212;x為賴氨酸含量(µg/mL),y為吸光值。
1.按照蛋白濃度計算
賴氨酸含量(µg/mg prot)=[(△A +0.0212)÷0.0062×V1]÷(Cpr ×V1)×1.1515
=185.73×(△A+0.0212) ÷Cpr
2.按照樣本質量計算
賴氨酸含量(µg/g干重)=[(△A +0.0212)÷0.0062×V1]÷(W ×V1÷V2)×1.1515
=185.73×(△A+0.0212) ÷W
V1:加入反應體系中樣本體積,0.1mL;V2:加入提取液體積,1 mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;1.1515,校正系數。
b.用96孔板測定的計算公式如下
標準條件下測定回歸方程為y = 0.0031x - 0.0212;x為賴氨酸含量(µg/mL),y為吸光值。
1.按照蛋白濃度計算
賴氨酸含量(µg/mg prot)=[(△A +0.0212)÷0.0031×V1]÷(Cpr ×V1)×1.1515
=371.45×(△A+0.0212) ÷Cpr
2.按照樣本質量計算
賴氨酸含量(µg/g干重)= [(△A +0.0212)÷0.0031×V1]÷(W ×V1÷V2)×1.1515
=371.45×(△A+0.0212) ÷W
V1:加入反應體系中樣本體積,0.1mL;V2:加入提取液體積,1 mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;1.1515,校正系數。
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