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RT-PCR 實驗中的逆轉錄酶的三種活性介紹

時間:2024/1/22閱讀:877
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       逆轉錄酶是存在于 RNA 病毒體內的依賴 RNA 的 DNA 聚合酶。RT-PCR 實驗中的逆轉錄酶需要具有以下三種活性:

1. 依賴 RNA 的 DNA 聚合酶活性:以 RNA 為模板合成 cDNA 的第一條鏈;

2. Rnase 水解活性:水解 Rnase 雜合體中的 RNA;

3. 依賴 DNA 的 DNA 聚合酶活性:以一條 DNA 鏈為模板合成互補的雙鏈 DNA

在選擇逆轉錄酶時,建議選擇無 RNaseH①活性(RNaseH-)的逆轉錄酶。具有 RNaseH 活性的逆轉錄酶的 RNaseH 活性會與聚合酶活性競爭 RNA 模板與 DNA 引物(或 cDNA 延伸鏈)形成的雜合鏈,并降解雜合鏈中的 RNA 鏈。被 RNaseH 活性所降解的 RNA 模板不能再作為合成 cDNA 的有效底物,降低了 cDNA 合成的產量與長度。

 


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