東西部馬腦脊髓炎病毒（VV）熒光PCR法【儲(chǔ)存條件及有效期】

1．避光-20℃儲(chǔ)存，有效期 12 個(gè)月。

2．低溫運(yùn)輸不能超過(guò) 4 天；開(kāi)封后避光-20℃儲(chǔ)存，對(duì)有效期沒(méi)有影響。避免反復(fù)凍融，凍融 6 次不影響檢測(cè)效果。

3．生產(chǎn)日期、有效期至：見(jiàn)外包裝盒。

【適用儀器】

適用于 ABI 7500、Bio-Rad CFX96、Roche480 等全自動(dòng)熒光PCR 檢測(cè)儀。

【樣本要求】

1．樣本種類(lèi)：鼻/咽拭子、痰液、支氣管肺泡灌洗液；培養(yǎng)物等樣品。

2．保存條件：采集的標(biāo)本應(yīng)及時(shí)送檢，24 小時(shí)內(nèi)檢測(cè)的應(yīng) 4℃保存，超過(guò) 24 小時(shí)的最好-70℃保存，并避免反復(fù)凍融。

【檢測(cè)方法】

1 ． 試劑準(zhǔn)備（試劑準(zhǔn)備區(qū)）

將試劑盒各組分置 4℃避光融化，充分混勻后瞬間離心。計(jì)算試劑使用份數(shù) N（N=樣本數(shù)+1 管陽(yáng)性對(duì)照+1 管陰性對(duì)照），根據(jù)下表配置反應(yīng)體系mix，加入一適當(dāng)體積離心管中，充分混勻后瞬間離心，按 20μL 分裝至 PCR 反應(yīng)管/板，并轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。

【結(jié)果分析條件設(shè)定】：

u 基線（Baseline）設(shè)定：應(yīng)選擇該次實(shí)驗(yàn)指數(shù)擴(kuò)增前所有樣本熒光信號(hào)比較穩(wěn)定的一段區(qū)域（所有樣本熒光信號(hào)無(wú)較大波動(dòng)），起始點(diǎn)（Start）應(yīng)避開(kāi)熒光采集起始階段的信號(hào)波動(dòng)，終止點(diǎn)（End）應(yīng)比最早出現(xiàn)指數(shù)擴(kuò)增的樣本Ct值減少1~3個(gè)循環(huán)，建議基線設(shè)為6~15。

u 閾值(Threshold)設(shè)定：將閾值線設(shè)定在剛好超過(guò)正常陰性質(zhì)控品擴(kuò)增曲線的最高點(diǎn)。

【質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)】：

1.   陰性質(zhì)控品的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為陰性，無(wú)指數(shù)擴(kuò)增期，Ct=40或無(wú)Ct；

2.   陽(yáng)性質(zhì)控品的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為陽(yáng)性，有明顯的指數(shù)擴(kuò)增期，Ct值應(yīng)小于等于35；

3.   以上要求需在一次實(shí)驗(yàn)中同時(shí)滿(mǎn)足，否則該次實(shí)驗(yàn)視為無(wú)效。

【結(jié)果判斷】：

1.   陽(yáng)性：有明顯的指數(shù)擴(kuò)增期，且Ct＜38；

2.可疑：有明顯的指數(shù)擴(kuò)增期，且38≤Ct<40，此時(shí)樣本為可疑樣本；對(duì)于可疑樣本建議復(fù)核一次，若復(fù)核結(jié)果Ct<40且有指數(shù)擴(kuò)增期，則判定為陽(yáng)性，否則判定為陰性；

3.   陰性：無(wú)指數(shù)擴(kuò)增期，Ct=40或無(wú)Ct值均判定為陰性樣本。

【注意事項(xiàng)】：

             1．PCR 操作各階段應(yīng)嚴(yán)格分區(qū)操作，避免交叉污染。

             2．試劑盒各組分使用前應(yīng)充分融化混勻，離心數(shù)秒后使用。

             3．各組分不得與其他產(chǎn)品或不同批號(hào)的相應(yīng)成分進(jìn)行互換。

             4．待測(cè)標(biāo)本若不及時(shí)檢測(cè)，應(yīng)保存于-20℃或-70℃。

             5．樣品的處理應(yīng)該嚴(yán)格按照生物安全規(guī)范操作。

             6．PCR 操作人員應(yīng)具有經(jīng)驗(yàn)和受過(guò)專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)。

             7．本試劑盒僅用于科研使用，不做為臨床診斷使用。

公司正在出售的產(chǎn)品：