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大鼠嗜堿性粒細胞性白血病細胞;RBL-1操作步驟

時間:2021/7/13閱讀:238
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大鼠嗜堿性粒細胞性白血病細胞;RBL-1操作步驟:

1)貼壁細胞傳代:提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi),吸除或倒掉細胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液,加少量PBS潤洗細胞,加入適量胰酶,使胰酶的量能蓋住細胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶,加入新鮮培養(yǎng)基,晃動細胞瓶,終止胰酶作用,用吸管小心吹打貼壁的細胞,制成細胞懸液。控制吹打的力度,避免產(chǎn)生大量的氣泡,將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng),隔天觀察貼壁生長情況。
2)懸浮細胞傳代:將細胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi),1000rpm離心5min,棄去上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,用吸管小心吹散沉淀,制成細胞懸液,將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng)。

冷凍保存方法一:冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽長期儲存。
冷凍保存方法二:冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3℃至–80℃以下,再放入液氮槽期儲存。-20℃不可超過1小時,以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中,但存活率稍微降低一些。

 GV3101感受態(tài)細胞(化學(xué)轉(zhuǎn)化法或熱激法)
GV3101(pSoup)感受態(tài)細胞(化學(xué)轉(zhuǎn)化法或熱激法)
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GV3101(pSoup-p19)感受態(tài)細胞(化學(xué)轉(zhuǎn)化法或熱激法)
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AGL1感受態(tài)細胞(化學(xué)轉(zhuǎn)化法或熱激法)
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LBA4404感受態(tài)細胞(化學(xué)轉(zhuǎn)化法或熱激法)
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EHA101感受態(tài)細胞(化學(xué)轉(zhuǎn)化法或熱激法)
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GV3101 電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞
GV3101 電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞
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