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人Dickkopf 1ELISA檢測試劑盒?操作步驟

時間:2021/9/28閱讀:242
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人Dickkopf 1ELISA檢測試劑盒操作步驟:


1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在di一、第二孔中分別加標準品100μl,然后在di一、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從di一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為180 ng/L,120 ng/L ,60 ng/L,30 ng/,15 ng/L)。

2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同3。

8. 洗滌:操作同5。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘。

人乳腺導管癌細胞;ZR-75-30

人急性T淋巴細胞性白血病細胞;I 2.1(CRL-2572)

人膀胱癌細胞;5637(HTB-9)

人腎透明細胞腺癌細胞;786-O [786-0]

人腎透明細胞癌;Caki-1

人胰腺導管癌細胞;CFPAC-1

人食管癌細胞;EC109

人結直腸腺癌細胞;HCT-15 [HCT15]

人結直腸腺癌細胞;LS 174T [LS174T]

人乳腺癌細胞;MDA-MB-468

人肺支氣管癌細胞;NCI-H1650

人非小細胞肺腺癌細胞;NCI-H1975

人非小細胞肺腺癌細胞;NCI-H2087

人小細胞肺癌;NCI-H2227

人非小細胞肺癌細胞;NCI-H23

人腎上腺皮質腺癌細胞;NCI-H295R

小鼠源細胞

小鼠胚胎成纖維細胞;3T3-Swiss albino

小鼠T淋巴細胞瘤細胞;Cyc-Tag(S49)

小鼠骨髓細胞;FDC-P1

小鼠垂體瘤細胞;GT1-1

小鼠胚胎成骨細胞前體細胞;MC3T3-E1

小鼠胚胎成纖維細胞;NIH/3T3

小鼠睪丸畸胎瘤細胞;P19

小鼠胚胎成纖維細胞(來自NIH3T3);PA12

小鼠血細胞;WEHI-3 [WEHI3]

小鼠成纖維細胞;φ2

小鼠紅白血病細胞;MEL

小鼠骨髓瘤細胞;Sp2/0-Ag14


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