雞γ干擾素（IFN-γ）Elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
 

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中雞γ干擾素(IFN-γ)水平。用純化的雞γ干擾素(IFN-γ)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入γ干擾素(IFN-γ)，再與HRP標(biāo)記的雞γ干擾素(IFN-γ)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的γ干擾素(IFN-γ)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中雞γ干擾素(IFN-γ)濃度。

標(biāo)本要求

    1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

   2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
120pg/ml

5號標(biāo)準(zhǔn)品

150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

60pg/ml

4號標(biāo)準(zhǔn)品

150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

30pg/ml

3號標(biāo)準(zhǔn)品

150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

15pg/ml

2號標(biāo)準(zhǔn)品

150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

7.5pg/ml

1號標(biāo)準(zhǔn)品

150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

雞γ干擾素（IFN-γ）Elisa試劑盒操作總程序：
計算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)， OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與  OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。

注意事項(xiàng)
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未
用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有
析出，稀釋時可在浴中加溫助溶，洗滌時不影響。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時間
控制在 5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4．請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本  OD值
大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的 OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計
算時請后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉
6．底物請避光保存。
7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行試驗(yàn)。
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。

雞γ干擾素（IFN-γ）Elisa試劑盒保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月