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測定意義

生物體內超氧陰離子等活性氧具有免疫和信號傳導的作用，但積累過多時會對細胞膜及生物大分子產生破壞作用，導致機體細胞和組織代謝異常，從而引起多種疾病。

測定原理：

超氧陰離子與鹽酸羥胺反應生成NO2－，NO2－在對氨基苯磺酸和α－萘胺的作用下，生成紅色的偶氮化合物，在530nm處有特征吸收峰，根據A530值可以計算樣品中O2－含量。

自備實驗用品及儀器：

天平、水浴鍋、離心機、可見分光光度計/酶標儀、1 mL玻璃比色皿/96孔板、和蒸餾水。

實驗方法學：

選擇抗凝的注意點：

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時可能會出現絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后

用于測定。

Bacillus subtilis subsp. subtilis組織型激肽釋放檢測試劑盒

Bacillus sp.胃蛋白原檢測試劑盒

Bacillus sp.甲狀腺球蛋白IgG抗體檢測試劑盒

Bacillus sp.游離雌三檢測試劑盒

Bacillus sp.鸚鵡衣原體IgG檢測試劑盒

Bacillus sp.結膜靜脈曲張IgG檢測試劑盒

Bacillus sp.結膜靜脈曲張IgM檢測試劑盒

Bacillus sp.沙門氏IgG抗體檢測試劑盒

超氧陰離子可見分光光度法檢測試劑盒試劑汞 ACS,99.9995% metals basis犬骨成型蛋白7(BMP7)免疫試劑盒化埃茲蛋白抗體MYOM2  肌間蛋白2抗體

化汞 AR,99.5 %（劇品）犬骨成型蛋白2(BMP-2)免疫試劑盒嗜性粒陽離子蛋白抗體MYOM1  肌間蛋白1抗體

化汞 ACS（劇品）犬鉤端螺旋體IgG(Leptospira)免疫試劑盒E1A樣分化抑制因子3抗體Myoglobin  肌紅蛋白抗體

化汞 AR,99.5%（劇品）犬弓形蟲循環抗原(TCA)免疫試劑盒骨骼肌烯化抗體MyoGEF  肌球蛋白相互作用G蛋白交換因子抗體

化汞 CP,99.0%（劇品）犬睪酮(T)免疫試劑盒真核翻譯起始因子2C1抗體MYOG/Myogenin  肌紅蛋白抗體(肌生成素)

硝汞 AR,98.5%（劇品）犬高遷移率族蛋白A2(HMGA-2)免疫試劑盒化eIF4E結合蛋白抗體MyoD1/Myf3  肌原調節蛋白抗體

硝汞 CP,98.0%（劇品）犬高遷移率族蛋白A1(HMGA-1)免疫試劑盒附睪蛋白抑制蛋白Myocardin  促血管平滑肌分化因子抗體

硝汞 GR,99.0%（劇品）犬高爾體膜蛋白1(GOLM1)免疫試劑盒內皮素B受體抗體MYLK3  肌球蛋白輕鏈激3抗體

紅色 AR,99.5%（劇品）犬肝素輔因子Ⅱ(HCⅡ)免疫試劑盒大腸桿菌脂多糖抗體MYLK2  肌球蛋白輕鏈激2抗體

黃色 AR,99.5%（劇品）犬肝堿性(L-ALP)免疫試劑盒GLP1類似蛋白Exendin4抗體MYLIP/Idol  低密度脂蛋白受體的誘導降解蛋白抗體

乙汞 AR,98.0%（劇品）犬甘油-3-脫氫(GAPDH)免疫試劑盒化真核翻譯起始因子4B抗體MYL9  肌球蛋白輕鏈9抗體

 AR,99.5%（劇品）犬干擾素誘導蛋白10(IP-10/CXCL10)免疫試劑盒上皮癌轉化蛋白2抗體MYL7  肌球蛋白輕鏈7抗體

 CP,99.0%（劇品）犬泛素蛋白(Ub)免疫試劑盒化轉錄因子E2F-1抗體MYL6  肌球蛋白輕鏈6抗體

硝亞汞 CP,98% 犬兒茶酚抑素(CAT)免疫試劑盒化轉錄因子E2F-1抗體MYL3/Myosin light chain 3  肌球蛋白輕鏈3抗體

汞溴紅 24～27%犬多肽YY(PYY)免疫試劑盒化因子受體抗體MYH9  肌球蛋白重鏈9抗體

操作步驟:

實驗開始前，各試劑均應平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量，如樣品濃度過高時，應對樣品進行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應的稀釋倍數。

1.        加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。

2.        棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl（在使用前一小時內配制），酶標板加上覆膜, 37℃反應60分鐘。

3.        溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內液體拍干）。

4.        每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 100μl，酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。

5.        溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內液體拍干）。

6.        依序每孔加底物溶液90μl，酶標板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7.       依序每孔加終止溶液50μl，終止反應，此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。

8.       用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。