實驗操作步驟：  

a．采用認可的方案處死嚙齒動物。

b．立即在無菌超凈臺內用70％乙醇擦洗整個動物。

c．用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。

d．用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無菌的培養皿上。

e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。

f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。

產品屬性：

產品介紹：

名稱    大鼠神經少突膠質細胞

2.組織來源：腦組織

3.產品規格：5×105cells/T25細胞培養瓶

4.細胞簡介：

大鼠神經少突膠質細胞分離自腦皮層組織；大腦分左右兩個半球，大腦皮質（灰質）覆蓋著每個大腦半球的大部分，它是神經元胞體集中的地方。內部則是由神經纖維或髓鞘構成的白質。每一個半球都有三個面，即外側面（約占整個皮質面積的1/3）、內側面和底面（占2/3的面積）；半球表面有很多深淺不等的溝或裂，溝或裂之間的隆起叫回，它們大大增加了大腦的表面積；大腦外側面重要的溝、裂有大腦外側裂、頂枕裂和中央溝。由于三溝裂之界隔，使大腦皮質組分為額葉、頂葉、顳葉、枕葉四大部分。少突膠質細胞分布于中樞神經系統，在銀浸染標本中，少突膠質細胞比星狀膠質細胞小，其突起也較小而少，呈珠狀，故被稱為少突膠質細胞或寡突膠質細胞。但是用特異性免疫細胞化學染色顯示的少突膠質細胞，其突起并不少，而且還有許多分支。少突膠質細胞的主要功能是在中樞神經系統中包繞軸突、形成絕緣的髓鞘結構、協助生物電信號的跳躍式高效傳遞并維持和保護神經元的正常功能。其異常不僅會導致中樞神經系統脫髓鞘病變，還會引起神經元損傷或精神類疾病，甚至可以引發腦腫瘤。根據少突膠質細胞的分布和位置可分為三種：①束間少突膠質細胞（interfasicular-oligodendrocyte），分布在中樞神經系統的白質的神經纖維束之間；②神經細胞周少突膠質細胞（perineuronal-oligodendrocyte），分布在中樞神經系統的灰質區，常位于神經細胞周圍，與神經細胞的關系密切，故又稱為神經細胞周衛星細胞（perineuronal-satellite-cell），但在神經細胞胞體與此類細胞之間亦常有星形膠質細胞的薄片狀突起分隔；③血管周少突膠質細胞（pcrivascular-oligodendrocyte），主要分布在中樞神經系統內的血管周圍。少突膠質細胞形成的髓鞘膜是最為特化和復雜動物細胞膜之一，其上有眾多跨膜蛋白和表面蛋白用以維持髓鞘的致密穩定結構。如半乳糖腦苷脂（GC），它是髓鞘的一種主要類脂，用GC抗體鑒別成熟的少突膠質細胞是一種比較早的免疫鑒定方法。近十年來，神經發育學科進展較快，更多的少突膠質細胞分子標記物被鑒定出來，如PDGFRa、Mbp、CNP、SOX-10。

5.方法簡介：

()實驗室分離的大鼠神經少突膠質細胞采用消化、混合細胞營養缺失培養、搖床振蕩結合差速貼壁法并通過專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質量檢測：

()實驗室分離的大鼠神經少突膠質細胞經GC（Galactocerebroside）免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

7.培養信息：

包被條件PLL（0.1mg/ml）

培養基含B-27 Supplement、PDGF-AA、bFGF、Penicillin、Streptomycin等

產品貨號CM-R180

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細胞形態梭形、多角形

傳代特性不增殖；不傳代

消化液0.25%

處理方法：

收到細胞后，檢查外包裝是否完整，細胞培養瓶是否完好。如有破損漏液等問題，請即時聯系。并進行以下操作：

1. 75%酒精棉球擦拭T25細胞培養瓶外部。

2. 將細胞放入37度培養箱中預溫3-4小時后再做處理，以穩定細胞狀態。

3. 預熱培養基（含10%胎牛血清，1%雙抗）。

4. 顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照保存（40×,100×,200×各一張）。

5. ①若細胞密度較小，無菌操作，去掉培養基。每瓶添加第四步中準備的5-6ml培養基。放到37度培養箱培養。待細胞密度達到80%以上，進行傳代。

注意事項：

1. 正式實驗前請選取幾個樣本做預實驗，以優化實驗條件，取得最佳實驗效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內壁上的液體離心至管底，

避免開蓋時試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗

并*清除殘留清潔劑。

6. 實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應按照規定程序處理。

細胞培養的優點：

1.研究的對象是活細胞

在實驗過程中，根據要求可始終保持細胞活力，并可長時間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態、結構、生命活動等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。

3.研究的樣本可以達到比較均一性

通過細胞培養一定代數后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。

4.研究內容便于觀察、檢測和記錄

采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備

記錄方式可采用攝影照片、縮時電影、電視等多種手段。

5.研究的范圍比較廣泛

應用的學科領域較為寬廣，如細胞學、免疫學、腫瘤學、生物化學、遺傳學、分子生物學等；

適用的對象范圍廣，從低等動物到高等動物，一種動物的不同年齡階段以及不同組織，都可進行有針對性的研究。

6.研究的費用相對較經濟

可提供大量、同一時期、重復性好的、生物學性狀相似的實驗對象。

2 ug pGL4.30 pGL4.30 低溫運輸，-20℃保存

鹽瓊脂（USP）  250g

1瓶 HEC-1-A細胞株 HEC-1-A 低溫運輸和保存

鹽增菌液（SC） Selenite Cystine Broth 10ml*20支/包

250U 核酸外切 T Exonulease T -20℃保存

100mL RNase-Free Potassium Acetate Solution（無RNase的乙酸鉀溶液），1M，pH7.5  RNase-Free Potassium Acetate Solut?嵌?L?

大鼠神經少突膠質細胞50uL 標記dUTP溶液（1mM） Biotin-11-dUTP -20℃保存

15次 植物線粒體純化試劑盒 Plant  Mitochondria Purification Kit 常溫保存

2 ug pBADZ-His6Cre pBADZ-His6Cre 低溫運輸，-20℃保存

MUG營養瓊脂 MUG Nutrient Agar 100g

10g 伊紅 Y, 醇溶性 Eosin Y  室溫陰涼干燥保存

500mL Mcilvaine Buffer (Citrate Phosphate Buffer),0.2M,pH4.0  Mcilvaine Buffer (Citrate Phosphate Buffer),0.2M,pH4.0  常溫保存

100mL 水飽和 Water-Saturated Phenol 常溫避光保存

500U Tth 核酸內切 IV Tth Endonuclease IV -20℃保存

CD68  CD68抗體 規格: 0.1ml

Rabbit Anti-mouse IgG/AP  堿性磷酸（AP）標記的兔抗小鼠IgG 規格: 0.1ml

Phospho-p70 S6 Kinase Beta (Thr421/Ser424)  磷酸化核糖體S6蛋白激β2抗體 規格: 0.1ml

Kappa-casein/CSN3  κ-酪蛋白抗體 規格: 0.2mlBeta-lactoglobulin  β-球蛋白抗體 規格: 1ml