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具有如下優點:
一、高效、靈敏、特異的抗體;
二、穩定的重復性和可靠性;
三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體;
四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養上清液、尿液等等多種標本類型;
五、性價比非常好,節省實驗經費。
產品名稱:大鼠二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)elisa試劑盒
英文名稱:Rat DPPⅣ ELISA Kit
規格:48T/96T
保存: 2-8℃(頻繁使用時);-20℃(長時間不用時)。
有效期: 6 個月(4℃);12 個月(-20℃)。
用途: 用于體外定量分析人血清、血漿、細胞培養上清、細胞裂解液
選擇ELISA試劑盒應從靈敏度、特異性、精密度、穩定性、簡便性、安全性及經濟性全面評價。?
操作流程如下:
(1)僅用于科研待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設3個平行孔;設兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。
(2)酶標板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內反應液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標板置37℃培養箱的濕盒內,孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標板置37℃培養箱的濕盒內,孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數據處理:在得出標本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。?
注意事項:
1加樣:
①實驗樣本過多時,可分批次操作,以減少實驗時間延長造成的誤差;
②加酶試劑后,用吸水紙吸干孔外試劑;
③作定量試驗時,使用加樣器加注試劑,并經常校正其準確性,此外,要做到一份樣本一個移液頭,防止交叉污染。
2.溫育:
①如有兩種溫度,盡量使用較低的溫育溫度、較長反應時間的條件;
②用1個小溫度計放置在板孔反應液中測量觀察;
③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學梯度會造成“邊緣效應”,因此盡量采用水浴;
3.洗板:
①手工洗板時,拍板時要垂直,避免交叉污染,用力不能過猛,防止抗原抗體復合物脫離;
②洗板機洗板時應經常檢查沖洗頭是否通暢,若被雜物堵塞時可用注射器針頭挑出;
③為了洗滌效果好,實驗室可采用機器與人工洗滌相結合的方法,在機器洗滌后再進行人工洗板1-2次,或適當增加洗板的次數;
4.顯色:
ELISA試劑盒中,如以四甲基聯苯胺(TMB)為底物,則提供的底物為A和B兩瓶應用液;如以鄰苯二胺(OPD)為底物,則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應條件為37℃或室溫反應15-30 min。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑,要臨用前30 min配制且必須避光。以四甲基聯苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光,但A、B液應盡量避免接觸金屬器械。
5.判定:
讀取結果要在15-30 min內完成,定性測定用肉眼判讀試驗結果時,反應板應水平距離白色背景10-15 cm;定量測定時用酶標儀讀取結果,酶標儀不應置于陽光或強光照射下,需先預熱15-30 min再進行測試。
試劑配制:
1、酶聯板(Assay plate ):一塊(96孔或者48孔)。
2、標準品(Standard):2瓶(凍干品)。
3、樣品稀釋液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4、生物素標記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6、生物素標記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7、辣根過氧化物酶標記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8、底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
腎足蛋白(NPHN)(酶聯免疫吸附試驗法) 99% 變異鹽單胞菌 10g
肌鈣蛋白T((酶聯免疫吸附試驗法) 99% 尖孢鐮孢 250g
α-胞襯蛋白(SPTAN1)(酶聯免疫吸附試驗法) 99% 黑木耳 50g
谷氨酸脫氫酶(GDH)(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 禾生殼二胞 100g
谷氨酸脫氫酶(GDH)(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 葡枝根霉 25g
谷氨酸脫氫酶(GDH)(酶聯免疫吸附試驗法) ≥98% 托姆青霉 1g
谷胱甘肽過氧化酶1(GPX1)(酶聯免疫吸附試驗法) ≥98% 靈芝(赤芝,紅靈芝) 25g
谷胱甘肽過氧化酶1(GPX1)(酶聯免疫吸附試驗法) ≥98% 茶莖點霉 5g
谷胱甘肽過氧化酶1(GPX1)(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 孟氏假單胞菌 25g
乳過氧化物酶(LPO)(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 泡盛曲霉 5g
乳過氧化物酶(LPO)(酶聯免疫吸附試驗法) 97% 葡萄園有孢漢遜酵母 1g
彈性蛋白(ELN)(酶聯免疫吸附試驗法) 96% 藍微褐鏈霉菌 1g
血管生成素1(ANGPT1)(酶聯免疫吸附試驗法) 96% 硬結節桿菌 5g
血管生成素1(ANGPT1)(酶聯免疫吸附試驗法) 97% 澤普林假絲酵母 1g
胃泌素(GT)(酶聯免疫吸附試驗法) 97% 施氏假單胞菌 25g
腦源性神經營養因子(BDNF)(酶聯免疫吸附試驗法) 97% 溶桿菌 5g
腦源性神經營養因子(BDNF)(酶聯免疫吸附試驗法) ≥97% 貝萊斯芽胞桿菌 100g
腦源性神經營養因子(BDNF)(酶聯免疫吸附試驗法) ≥97% 鞘氨醇盒菌屬 25g
大鼠二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)elisa試劑盒高效CHIP DNA分子克隆 TXB2(Thromboxane B2) 100 ul
高效CHIP DNA分子庫構建 KYN(Kynurenine) 100 ul
10倍PCR*緩沖液 FPGS(Folylpolyglutamate synthase) 100 ul
一步法PCR反應液 TXB2(Thromboxane B2) 100 ul
超白金TAG DNA聚合酶 OT(Oxytocin) 20 ul
三磷酸脫氧核糖核苷酸(dNTPs)混合液 KYN(Kynurenine) 100 ul
一步法平端PCR反應液 RFC1(Reduced Folate Carrier 1) 100 ul
一步法熒光定量PCR反應液 Acetylated p53(Acetylated p53) 100 ul
基因甲基化特異性PCR擴增(MSP) Cleaved P9(Cleaved Caspase-9) 100 ul
大量總RNA氯化銫純化 Cleaved P8(Cleaved Caspase-8) 100 ul
全血總RNA純化 Rbx2(RNF7) 100 ul
組織總RNA純化 FBLN3(Fibulin-3) 100 ul
細胞總RNA純化 Anti-tissue transglutaminase IgG(Anti-tissue transglutaminase IgG) 20 ul
植物總RNA純化(低多糖/酚) Ig(Immunoglobulin) 100 ul
植物總RNA純化(高多糖/酚) Cleaved BID/TBID(Cleaved BH3-interacting domain death agonist) 100 ul
植物mRNA直接純化 GABPA(GA-binding protein alpha chain) 100 ul
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