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菌種的培養：

1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長基質組成的繁殖材料。菌種分為母種（一級種）、原種（二級種）和栽培種（三級種）三級。工業發酵的有用菌種，其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復篩。

2、挑選具有某種能力的有用菌種，也稱種子制備，是指菌種在一定條件下，經過擴大培養成為具有一定數量和質量的純生產菌種的制備過程。以作接入發酵罐中進一步擴大菌體量及合成產物之用。

3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備 菌種制備。

4、保存在沙土管或冷凍管中的生產菌種，用無菌手續挑取少許，接入瓊脂斜面培養基上，在25℃（或較高溫度）下培養5～7天（或較長時間。所得孢子還需進一步用較大表面積的固體培養基以獲得更多孢子（對于霉菌類孢子制備，多數采用大米、小米之類的天然培養基）。

5、將培養成熟的斜面孢子制成懸浮液，接種到扁瓶固體培養基上，于25～28℃培養14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產上延續使用半年左右。

6、如果有些生產菌種不產孢子，如赤霉素產生菌或產孢子不多的，則可采用搖瓶液體培養制得菌絲體，作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發芽、生長、繁殖成大量菌體。其中的培養基組分應是易于被菌體利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米漿），及無機鹽(如磷酸鹽)等。作為發酵罐的種子應生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯，無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%～20%。

保存方法：

傳代保存法：培養基的濃度不宜過高，營養成分不宜過于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應在可能的范圍內盡量降低。培養溫度通常以稍低于最適生長溫度為好。若為產酸菌種，則應在培養基中添加少量碳酸鈣 [3] 。

液體石蠟覆蓋保存法：該法較前一種方法保存菌種的時間更長，適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細菌等的保存。

懸液保存法：

① 蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌，將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數年。本法應注意避免水分的蒸發。

② 糖液保存法：適用于酵母菌，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗處保存，可長達10年。除此之外，也可使用緩沖液或食鹽水等進行保存。

載體保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅膠保存法；④磁珠保存法；⑤麩皮保存法；⑥紙片(濾紙)保存法。

常用的冷凍保存法：

① 低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低溫冷凍保存時使用螺旋口試管較為方便，也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時菌液加量不宜過多，有些可添加保護劑。此外，也可用φ5mm的玻璃珠來吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器內，再放入低溫冰箱內進行保存的。

② 干冰保存法(-70℃左右)：即將菌種管插入干冰內，再置于冰箱內進行冷凍保存。

③ 液氮保存法(-196℃)：是適用范圍*的微生物保存法。

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多黏類芽孢桿菌4-羧肼鹽鹽 98%人α2巨球蛋白(α2-MG)免疫試劑盒DHX15蛋白抗體PAPP A2  相關血漿蛋白A2抗體

2-肼鹽鹽 98%人α2-HS糖蛋白(AHSG)抗體免疫試劑盒DIAPH2蛋白抗體PAPK/ALS2CR2  肌側索硬化癥相關蛋白2（2號染色體）抗體

3-肼 99%人α1微球蛋白/bikunin前體(AMBP)免疫試劑盒化蓬亂蛋白2抗體PAP2c/AP2-gamma  脂2C抗體

4-異肼鹽鹽 98%人α1性糖蛋白(α1-AGP)免疫試劑盒Wnt通路抑制因子2抗體PAP2B  脂2b抗體

3--2-氧吡 97%人α1抗胰糜蛋白(AACT)免疫試劑盒化B淋巴銜接分子DAPP1抗體PAP1/Acid Phosphatase 性抗體

2-氧吡-3- 97%人α1抗胰蛋白(α1-AT)免疫試劑盒化Fas相關死亡結構域蛋白抗體Pan-ras  Pan ras抗體

3-氧肼鹽鹽 98%人α1防御素(DEFA1)免疫試劑盒冷休克蛋白DBPA抗體PANK4  泛激4抗體

6-氧吡-3- 98%人α1β糖蛋白(α1β-GP)免疫試劑盒脫帽1A抗體PANK3  泛激3抗體

3-氨-2-氧吡 98%人α/β干擾素受體(IFN-α/βR)免疫試劑盒清道夫脫帽/熱休克蛋白1抗體PANK2  泛激2抗體

二異乙三氟化氫 95%人Z-DNA結合蛋白1(ZBP1)免疫試劑盒干擾素調節因子4結合蛋白抗體PANK1  泛激1抗體

3-肼鹽鹽 98%人Wnt-3a蛋白(WNT3A)免疫試劑盒DNA交聯修復蛋白1C抗體Pancreatic Lipase  胰脂肪抗體

嘧-5- 98%人v-rel禽網狀內皮過多癥病癌因同源物B(RelB)免疫試劑盒化凋亡相關蛋白激2抗體Pancreatic Amylase  胰淀粉抗體

s,s'-烯(p-硫代磺鹽) 97%人vav3核苷交換因子(VAV3)免疫試劑盒凋亡相關蛋白激樣蛋白1抗體pan methyl Lysine  泛賴氨抗體

3-肼鹽鹽  98%人U型肌激,線粒體(CKMT1A)免疫試劑盒化凋亡相關蛋白激1抗體pan 14-3-3  14-3-3蛋白抗體

鄰肼鹽鹽 98%人UV切除修復蛋白RAD23 同源物A(RAD23A)免疫試劑盒牙本質質蛋白1抗體PALB2  癌易感因相關蛋白2

微生物菌種的培養：

⒈ 孢子制備

⑴ 孢子的制備

一般采用瓊脂斜面培養基，培養基中含有一些適合產孢子的營養成分，如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無機鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1％，氮源不超過0.5％)，碳源豐富容易造成生理酸性的營養環境，不利于形成，氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下，干燥和限制營養可直接或間接誘導孢子形成。面的培養溫度大多數為28 ℃，少數為37 ℃，培養時間為5～14天。

⑵ 霉菌孢子的制備　

霉菌的孢子培養，一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農產品為培養基。這是由于這些農產品中的營養成分較適合霉菌的孢子繁殖，而且這類培養基的表面積較大，可獲得大量的孢子。霉菌的培養一般為25～28 ℃，培養時間為4～14天。

⒉ 種子制備

⑴ 搖瓶種子制備　

搖瓶種子進罐，常采用母瓶、子瓶兩級培養，有時母瓶種子也可以直接進罐。種子培養基要求比較豐富和*，并易被菌體分解利用，氮源豐富有利于菌絲生長。原則上各種營養成分不宜過濃，子瓶培養基濃度比母瓶略高，更接近種子罐的培養基配方。

⑵ 種子罐種子制備　

種子罐種子制備的工藝過程，因菌種不同而異，一般可分為一級種子、二級種子和三級種子的制備。孢子(或搖瓶菌絲)被接入到體積較小的種子罐中，經培養后形成大量的菌絲，這樣的種子稱為一級種子，把一級種子轉入發酵罐內發酵，稱為二級發酵。如果將一級種子接入體積較大的種子罐內，經過培養形成更多的菌絲，這樣制備的種子稱為二級種子，將二級種子轉入發酵罐內發酵，稱為三級發酵。同樣道理，使用三級種子的發酵，稱為四級發酵。