實驗操作步驟：  

a．采用認可的方案處死嚙齒動物。

b．立即在無菌超凈臺內(nèi)用70％乙醇擦洗整個動物。

c．用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。

d．用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無菌的培養(yǎng)皿上。

e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。

f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。

產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品介紹：

名稱    大鼠骨內(nèi)膜間充質(zhì)干細胞

2.組織來源：股骨、脛骨

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

4.細胞簡介：

大鼠骨內(nèi)膜間充質(zhì)干細胞分離自股骨、脛骨；骨內(nèi)膜是一層致密結締組織膜，覆蓋在骨的表面（關節(jié)面除外），新鮮骨內(nèi)膜呈粉紅色，含有豐富的血管、神經(jīng)和成骨細胞。此外，附著于骨的肌腱、韌帶于附著部位都與骨內(nèi)膜編織在一起。因而骨內(nèi)膜與骨質(zhì)結合甚為牢固。骨內(nèi)膜富含血管、神經(jīng)，通過骨質(zhì)的滋養(yǎng)孔分布于骨質(zhì)和骨髓。骨內(nèi)膜分內(nèi)、外兩層，外層主要是粗大的膠原纖維束，部分纖維穿入骨質(zhì)，使骨內(nèi)膜固定于骨面；內(nèi)層疏松，含成骨細胞和破骨細胞（分別具有產(chǎn)生新骨質(zhì)和改建骨的功能）。骨髓腔和骨松質(zhì)的網(wǎng)眼也襯著一層菲薄的結締組織膜，叫做骨膜。骨內(nèi)膜的內(nèi)層和骨膜有分化成骨細胞和破骨細胞的能力，以形成新骨質(zhì)和破壞、改造已生成的骨質(zhì)，所以對骨的發(fā)生、生長、修復等具有重要意義。骨內(nèi)膜間充質(zhì)干細胞是一種具有高度自我更新能力和多向分化潛能的干細胞，可以向骨、軟骨、肌組織、皮膚、脂肪、神經(jīng)等多種組織分化，因此可以作為組織工程中的種子細胞。骨內(nèi)膜間充質(zhì)干細胞的體外培養(yǎng)條件要求較高，在培養(yǎng)過程中，受貼壁時間、種植密度、血清含量、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)基pH值等條件的影響。

5.方法簡介：

()實驗室分離的大鼠骨內(nèi)膜間充質(zhì)干細胞采用沖洗骨髓、消化骨內(nèi)膜、差速貼壁法結合培養(yǎng)基篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測：

()實驗室分離的大鼠骨內(nèi)膜間充質(zhì)干細胞經(jīng)CD90免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

產(chǎn)品貨號CM-R161

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細胞形態(tài)成纖維細胞樣

傳代特性可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳

消化液0.25%

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

處理方法：

收到細胞后，檢查外包裝是否完整，細胞培養(yǎng)瓶是否完好。如有破損漏液等問題，請即時聯(lián)系。并進行以下操作：

1. 75%酒精棉球擦拭T25細胞培養(yǎng)瓶外部。

2. 將細胞放入37度培養(yǎng)箱中預溫3-4小時后再做處理，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

3. 預熱培養(yǎng)基（含10%胎牛血清，1%雙抗）。

4. 顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照保存（40×,100×,200×各一張）。

5. ①若細胞密度較小，無菌操作，去掉培養(yǎng)基。每瓶添加第四步中準備的5-6ml培養(yǎng)基。放到37度培養(yǎng)箱培養(yǎng)。待細胞密度達到80%以上，進行傳代。

注意事項：

1. 正式實驗前請選取幾個樣本做預實驗，以優(yōu)化實驗條件，取得最佳實驗效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，

避免開蓋時試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗

并*清除殘留清潔劑。

6. 實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應按照規(guī)定程序處理。

細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：

1.研究的對象是活細胞

在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結構、生命活動等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。

3.研究的樣本可以達到比較均一性

通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。

4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄

采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備

記錄方式可采用攝影照片、縮時電影、電視等多種手段。

5.研究的范圍比較廣泛

應用的學科領域較為寬廣，如細胞學、免疫學、腫瘤學、生物化學、遺傳學、分子生物學等；

適用的對象范圍廣，從低等動物到高等動物，一種動物的不同年齡階段以及不同組織，都可進行有針對性的研究。

6.研究的費用相對較經(jīng)濟

可提供大量、同一時期、重復性好的、生物學性狀相似的實驗對象。

5g 蘇丹Ⅲ Sudan Ⅲ 室溫保存 6.25-400 ng/mL ELISA Kit for Human Asporin

50T 玉米MON810 PCR檢測試劑盒  低溫運輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL 人質(zhì)子相關糖轉(zhuǎn)運蛋白A(PAST-A)ELISA試劑盒

15次 植物線粒體純化試劑盒 Plant  Mitochondria Purification Kit 常溫保存 0.156-10 ng/mL 人白介素1受體拮抗劑(IL1Ra/CD121)ELISA試劑盒

100mL HEPP?嵌?L?

大鼠骨內(nèi)膜間充質(zhì)干細胞Goat Anti-rabbit IgG/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555標記的羊抗兔IgG 規(guī)格: 0.1ml

Mouse Anti-human IgG(3D3)/AP  堿性磷酸（AP）標記的鼠抗人IgG單克隆抗體 規(guī)格: 0.1ml

Phospho-HSP27(Ser78)  磷酸化熱休克蛋白27抗體 規(guī)格: 0.1ml

beta-Amyloid 1-40(CT)  β淀粉樣肽1-40(C端)抗體 規(guī)格: 0.1mlC19orf46  19號染色體開放閱讀框46抗體 規(guī)格: 0.2ml

C17orf57  17號染色體開放閱讀框57抗體 規(guī)格: 0.2ml

CK19/CK17/CK14/CK10/CK42  細胞角蛋白19，17，14，42，10抗體 規(guī)格: 0.1ml

Phospho-HER4 (Tyr1188)  磷酸化HER4抗體 規(guī)格: 0.1ml

IFN gamma  干擾素-γ抗體 規(guī)格: 0.1ml

30次 植物總蛋白質(zhì)微量提取試劑盒 (SDS-PAGE) Plant Total Protein Miniprep Kit (SDS-PAGE) 常溫保存

500g 硼酸 Boric Acid 室溫保存

250mL HEPES Buffer,1M,pH6.5  HEPES Buffer,1M,pH6.5  常溫保存

50T 鉤狀螺旋體PCR檢測試劑盒   低溫運輸，-20℃保存