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土壤酸性磷酸酶(SACP)熒光法檢測試劑盒

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產品型號

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廠商性質經銷商

所  在  地上海市

更新時間:2022-04-27 15:41:13瀏覽次數:267次

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貨號 GOY-01S6838
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商品屬性:

產品名稱

土壤酸性磷酸酶(SACP)熒光法檢測試劑盒

規格

100管/96樣

檢測方法

熒光法

貨號

GOY-01S6838

商品介紹:

測定意義

土壤磷酸酶是一類催化土壤有機磷化合物礦化的酶,其活性的高低直接影響著土壤中有機磷的分解轉化及其生物有效性,是評價土壤磷素生物轉化方向與強度的指標。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH顯著影響。通常按照其最適pH范圍,分為堿性、中性和酸性三種類型磷酸酶。

測定原理:

堿性環境中,S-AKP/ALP催化磷酸苯二鈉水解生成和,通過測定酚的生成量即可計算出S-AKP/ALP活性。

自備儀器和用品:

紫外分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、臺式離心機、37℃恒溫培養箱、分析天平、可調式移液器、冰、蒸餾水、無水乙醇和甲苯。

實驗方法學:

一、肝素的配制:

市售肝素凍干粉140單位/mg1克瓶裝,每瓶140000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50100μl濕潤管壁,可抗凝人血35ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50100μl,可抗凝鼠血24ml

肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉動,每隔510分鐘轉動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使25ml血液不凝固。

二、血液樣本的收集:

全血根據收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。

1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置12小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。

2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA

選擇抗凝的注意點:

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后

用于測定。

橡膠PTFE墊片,配套120ZSS棕色瓶,φ20mm*1.4mm赫斯特熒光燃料,33342 98%Anti-DCN/FITC  熒光素標記抗核心蛋白聚糖抗體IgG

中空純四氟塞,配套120ZSS玻璃瓶,φ18*18胞內鈣熒光探針BAPTA, AM  95%Anti-DCP/FITC  熒光素標記異常原/脫-γ-羧基原抗體IgG

橡膠覆PTFE墊片,匹配30Zss黑色低蓋,φ18*1.52',7'-二-(2-羧乙基)-5(6)-羧基熒光素 90%Anti-DCP /HRP  辣根過氧化物標記異常原/脫-γ-羧基原抗體IgG

橡膠覆PTFE墊片,匹配500MLZPA棕色瓶低蓋,φ25.5*1.52',7'-二-(2-羧乙基)-5(6)-羧基熒光素乙酰甲酯1 mg/ml,溶劑:DMSOAnti-DCX/FITC  熒光素標記雙皮質素抗體IgG

500ZPA四氟柱塞,匹配500MLZPA棕色瓶,Ф23*27.7 ,2',7'-二-(2-羧乙基)-5(6)-羧基熒光素乙酰甲酯Mixed isomersAnti-Phospho-Doublecortin (Ser297) /FITC  熒光素標記兔抗人、大、小鼠等化雙皮質素抗體IgG

30ZSS中空四氟塞,φ16*17.36-羧基熒光素 95%Anti-D-DIMER/FITC  熒光素標記交聯纖維蛋白二聚體抗體IgG

PTFE墊片,匹配2ml棕色螺紋玻璃瓶和瓶蓋,φ9*1.55-羧基熒光素 95%Anti-DDAH-II /FITC   熒光素標記雙甲基精水解2抗體IgG

PTFE墊片,匹配3ml棕色螺紋玻璃瓶和瓶蓋,φ11.8*1.55-羧基四甲基羅丹明 95%Anti-DDB1/FITC  熒光素標記損傷DNA結合蛋白1抗體IgG

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操作步驟:

實驗開始前,各試劑均應平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量,如樣品濃度過高時,應對樣品進行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應的稀釋倍數。

1.        加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。

2.        棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時內配制),酶標板加上覆膜, 37℃反應60分鐘。

3.        溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。

4.        每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。

5.        溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。

6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶標板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內,此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。

7.       依序每孔加終止溶液50μl,終止反應,此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。

8.       用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。

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