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輔酶ⅡNADP(H)含量微量法檢測試劑盒

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所  在  地上海市

更新時間:2022-04-24 12:02:23瀏覽次數:293次

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貨號 GOY-01S6349
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【友情提示】:本產品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。避免給您帶來不必要的損失,請仔細閱讀購買說明!

產品名稱

規格

檢測方法

貨號

輔酶ⅡNADP(H)含量微量法檢測試劑盒

100管/48樣

微量法

GOY-01S6349

商品介紹

測定意義

輔酶ⅡNADP(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,NADP+NADPH含量測定可以計算NADPNADPH + NADP+ )含量和NADPH/NADP+比值,其變化與磷酸戊糖途徑和生物合成以及抗氧化反應密切相關。NADPH/NADP+比值不僅是細胞氧化還原態的主要標志之一,而且在PPP途徑、生物合成和抗氧化代謝中具有重要調控作用。

測定原理

分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NADP+NADPHNADPH通過PMS的遞氫作用,使氧化型噻唑藍(MTT)還原為甲瓚,570nm下檢測吸光值,從而測定NADPH含量。利用6-磷酸葡萄糖脫氫酶還原NADP+NADPH,從而檢測NADP+含量。

所需的儀器和用品

可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制:

提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;

試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;

試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;

試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;

試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
QQ截圖20220307153443.png

所需的儀器和用品:

可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水

四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:

建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗

樣本和試劑浪費!

1、樣本制備

① 組織樣本:

取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進行

勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。

【注】:若增加樣本量,可按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進行提取

② 細菌/細胞樣本:

先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL

提取液,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次);

12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

【注】:若增加樣本量,可按照細菌/細胞數量(10

4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。

注意事項:

1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時在冰上放置。

2、對照管只需要做一管。

3、若對照管吸光值大于 1,建議將試劑二用蒸餾水稀釋 7 倍后使用(10μL 試劑二原液+60μL蒸餾水)。

4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數值在什么范圍?對照管的范圍是 0.4-1。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現配現用;

2)沒有按順序加試劑;(3)反應時間不夠,可以延長反應時間(反應時間 30min可以延長到 40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應倍數。

若出現測定管大于對照管,可能是樣本中雜質的影響太大,為了降低雜質的影響一般

將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋 10倍后再測,通常可以使測定正常。

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輔酶ⅡNADP(H)含量微量法檢測試劑盒正辛 AR,99%化肌球蛋白抗體CLNS1A/pICln  離子通道調節蛋白1A抗體

1,2- AR,99%化肝生長因子受體(原癌因)抗體CLN6  神經蠟樣質脂褐質沉積病蛋白CLN6抗體

紅鋁溶液 70 wt%溶液絲裂原活化蛋白激MKK6抗體CLN3  神經蠟樣質脂褐質沉積病蛋白CLN3抗體

氫化鈉 98%化絲裂原活化蛋白激MKK3/6抗體CLLD8/SETDB2  組蛋白H3-K9轉移抗體

三乙烯四 Standard for GC化絲裂原活化蛋白激MKK6抗體CLLD7  核苷交換因子CLLD7抗體

三乙烯四 CP,68%嗜粒趨化蛋白22抗體CLLD6/C13orf1  慢性淋巴白血病缺失因6蛋白抗體

三乙烯四 AR,70%硫氨腦啡肽抗體CLK3  分裂周期樣激3抗體

三乙烯四 色譜固定液抗體CLK2  分裂周期樣激2抗體

三異 95%質金屬蛋白9抗體CLIP1/CLIP170  質連接蛋白1抗體

3,5,5-己 97%原癌因M-ras抗體CLIC4  內離子通道蛋白4抗體

三羥烷 98%單核趨化蛋白1抗體Clenbuterol Hydrochloride(Spiropent)  鹽克侖特羅/抗體

3,4,5,6-四氫酐 98%抗體CLECSF9/CLEC 4E  C型凝集素4家族E抗體

己二 98%雞支原體抗體CLEC5A/MDL1  C型凝集素結構域家族5成員A抗體

三硅烷 98%線粒體轉錄因子1抗體CLEC2D/OCIL  CLEC2D蛋白抗體

六亞二異酯  97%有絲分裂抑制缺陷蛋白1抗體CLEC2/CLEC1B  C型凝集素結構域家族1成員B抗體

測定步驟:

1、 酶標儀預熱30min以上,調節波長至450nm。

2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。

3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測定樣本較少,可按照實際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)

4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內用完)。

5、 樣本測定(在96孔板中依次加入下列試劑)

選擇抗凝的注意點:

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測定。

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