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乙醇脫氫酶(ADH)紫外分光光度法

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所  在  地上海市

更新時間:2022-04-24 11:56:48瀏覽次數:181次

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貨號 GOY-01S6342
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操作步驟:

實驗開始前,各試劑均應平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量,如樣品濃度過高時,應對樣品進行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應的稀釋倍數。

1.        加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。

2.        棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時內配制),酶標板加上覆膜, 37℃反應60分鐘。

3.        溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。

4.        每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。

5.        溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。

6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶標板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內,此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。

7.       依序每孔加終止溶液50μl,終止反應,此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。

8.       用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。

28.png 

商品屬性:

產品名稱

乙醇脫氫酶(ADH)紫外分光光度法

規格

50管/48樣

檢測方法

紫外分光光度法

貨號

GOY-01S6342

商品介紹:

測定意義

ADH是生物體內短鏈醇代謝的關鍵酶,催化乙醇與乙醛可逆轉換,在很多生理過程中起著重要作用。哺乳動物ADH主要在肝臟生成,肝臟損傷導致ADH釋放到血清中。血清ADH活性高低反映了肝功能是否異常。

測定原理:

ADH催化NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+,NADH在340nm處有吸收峰,而NAD+沒有;測定340nm 吸光度下降速率,來計算ADH活性。

自備儀器和用品:

研缽、冰、低溫離心機、紫外分光光度計、1ml石英比色皿、可調式移液器和雙蒸水。

實驗方法學:

一、肝素的配制:

市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50100μl濕潤管壁,可抗凝人血35ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?/span>0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50100μl,可抗凝鼠血24ml。

肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉動,每隔510分鐘轉動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使25ml血液不凝固。

二、血液樣本的收集:

全血根據收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。

1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置12小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。

2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA

選擇抗凝的注意點:

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后

用于測定。

二甲基雙十八烷基氯化銨 97%2-苯基 98%Anti-MIP-3 Beta/ELC/CCL19/FITC  熒光素標記巨噬炎性蛋白3β 抗體IgG

N-乙基-N-(3-磺基)-3-甲氧基苯鈉鹽 99%1,3-二(4-氨苯氧基)苯 98%Anti-MIP4/CCL18/FITC  熒光素標記巨噬炎癥蛋白4抗體IgG

十六烷基二甲基乙基 98%2-基吡 98%Anti-Midnolin isoform Protein 1/FITC  熒光素標記中腦核仁蛋白1抗體IgG

N-乙基-N-(3-磺基)-3-鈉鹽 98%對苯甲酸叔丁酯 98%Anti-Midnolin isoform Protein 2/FITC  熒光素標記中腦核仁蛋白2抗體IgG

N-乙基-N-(2-羥基-3-磺基)-3-甲氧基苯鈉鹽 99%3,5-二三氟甲苯 98%Anti-MIF /FITC  熒光素標記巨噬移動抑制因子抗體IgG

N-乙基-N-(3-磺基)苯鈉鹽 99%4-叔丁基環己 98%Anti-MITF/FITC  熒光素標記小眼相關轉錄因子抗體IgG

2-乙基己氧基 99%間三氟甲苯 99%Anti-Mitofilin/IMMT /FITC  熒光素標記線粒體內膜蛋白抗體IgG

固藍B 90%2-乙酰吡 98%Anti-MK(Midkine)  熒光素標記中期因子/肝素結合生長因子抗體IgG

乙醇脫氫酶(ADH)紫外分光光度法聚乙二單 平均分子量1000雞可溶性間粘附分子1(sICAM-1)免疫試劑盒酰肽受體3抗體(脂氧素A4受體)MAPKAP Kinase 2  絲裂原活化蛋白激活化的蛋白激2抗體

98%雞可溶性E選擇素(sE-selectin)免疫試劑盒兜蛋白抗體MAPK4  絲裂原活化蛋白激4抗體

1,3- 98%雞抗人IgM antibody 免疫試劑盒脂肪堆積和肥胖相關蛋白抗體MAPK13/SAPK4/p38delta  絲裂原活化蛋白激13抗體

氫氧化 AR,90%雞抗人IgG antibody 免疫試劑盒核苷交換因子FARP2抗體MAPK11/p38Beta  絲裂原活化的蛋白激p38β抗體

結晶碳 CP,98%雞抗人IgA antibody 免疫試劑盒FK506結合蛋白相關蛋白抗體(他克莫司相關蛋白)MAPK organizer 1/Morg1  絲裂原活化蛋白激組織蛋白1抗體

三鈉 97%雞抗Ⅲ(AT-Ⅲ)抗體免疫試劑盒成纖維生長因子受體1原癌因伴侶蛋白抗體MAP-9  微管相關蛋白9抗體

丁二酐 AR,98%雞抗鏈球菌溶血素O(ASO)抗體(IgM)免疫試劑盒鈣粘蛋白家族成員7抗體MAP7D1/RPRC1  精氨/脯氨富含卷曲蛋白1抗體

丁二 AR,99.5%雞抗鏈球菌溶血素O(ASO)抗體(IgG)免疫試劑盒Ⅲ型纖維連接蛋白域蛋白2/5抗體MAP65/ASE 1  擬南芥MAP65蛋白抗體

氫氧化鈉 AR,96%雞抗肌內膜抗體IgA(EMA IgA)免疫試劑盒細絲蛋白A抗體MAP4K6/MINK1  絲裂原活化蛋白激MAP4K6抗體

氫氧化鈉 GR,97%,片狀雞巨噬替代激活相關化學因子1(AmAC-1)免疫試劑盒化細絲蛋白A抗體MAP4K4  絲裂原活化蛋白激MAP4K4抗體

AR,99.0%雞窖蛋白Caveolin-1(CAV1)免疫試劑盒化細絲蛋白A抗體MAP4K1  造血祖激1抗體

測序雞降鈣素(CT)免疫試劑盒DNA損傷修復因XRCC9抗體MAP4  微管相關蛋白4抗體

for HPLC, ≥99.5% (GC)雞堿性成纖維生長因子(bFGF)免疫試劑盒化細絲蛋白A抗體MAP3K9  絲裂原活化蛋白激3K9抗體

for LC-MS, ≥99.5%雞狀腺素(T4)免疫試劑盒化神經膜抗體MAP3K8/TPL2  絲裂原活化蛋白激激8抗體

三酐(TFAH) 衍生級 (for GC), ≥99.0% (GC)雞狀旁(PTH)免疫試劑盒化堿性成纖維生長因子受體1抗體MAP3K7IP3  NFKB激活蛋白1抗體


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