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非洲分枝桿菌PCR檢測試劑盒說明書

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更新時間:2019-04-18 09:15:48瀏覽次數:309次

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非洲分枝桿菌PCR檢測試劑盒說明書用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種呼吸道及腸道致病菌,可實現對臨床樣品及其他環境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。

組成及試劑配制:
1、非洲分枝桿菌PCR檢測試劑盒說明書酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。

產品名稱英文名稱價格
非洲分枝桿菌PCR檢測試劑盒說明書Abalone Spherical VirusPCR電詢


樣本采集、存放及運輸:
1、樣本采集:各類型樣本按照常規方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應避免反復凍融(多凍融3次);
3、運輸:采用泡沫箱加冰密封進行運輸。
【標本要求】
人體鼻腔或咽部分泌物:用無菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物,將分泌物或咽拭子置入無菌玻璃管(含0.4ml滅菌生理鹽水),用無菌棉球將試管塞緊后,密閉送檢。標本可立即用于檢測,也可保存于-20℃待測。
【檢驗方法】
1.標本、對照品的核酸裂解處理
用商品化(取得醫療器械許可證)的RNA提取試劑盒處理標本,具體操作參見該試劑盒說明書。
或用Trizol法提取,方法如下:取100?l樣品置于1.5ml 離心管中,加入300?l裂解液(Trizol),再加入100, 混勻器上振蕩混勻5sec或顛倒混勻15次; 13000rpm離心15min, 吸取上層液體,加入等體積異丙醇,顛倒混勻室溫靜置10min, 13000rpm離心10min,輕輕倒去上清;加入700?l 75%乙醇,顛倒洗滌,13000rpm離心5min,輕輕倒去上清,倒置于吸水紙上,棄盡液體或4000rpm離心5sec,將管壁上的殘余液體甩到管底部,用微量加樣器盡量吸干液體,加入20?l DEPC-H2O溶解RNA。
2.試劑配制
取n×19?l H7N9核酸熒光PCR檢測混合液與n×1?l RT-PCR酶(n為反應管數),振蕩混勻數秒, 3000rpm離心數秒。
3.加樣取上述混合液20?l置于PCR管中,然后將樣品核酸提取液、DEPC-H2O、陽性對照品各5?l分別加入PCR管中,蓋好管蓋,立即進行PCR擴增反應。
4. PCR擴增反應管置于定量熒光PCR儀上,推薦循環參數設置:
45℃×10min; 95℃×15min;循環一次,再按95℃×15sec→60℃×60sec,循環45次;單點熒光檢測在60℃,反應體系為25?l。
熒光通道檢測選擇:選用FAM通道。

Bcl3 ELISA Kit富含亮氨酸重復家庭蛋白3抗體B-細胞淋巴瘤因子3(Bcl3)ELISA試劑盒
Bcl2 ELISA Kit富含亮氨酸重復蛋白10抗體B-細胞淋巴瘤因子2(Bcl2)ELISA試劑盒
Bcl10 ELISA Kit富含亮氨酸重復家庭蛋白2抗體B-細胞淋巴瘤因子10(Bcl10)ELISA試劑盒
BLNK ELISA Kit富含亮氨酸重復死亡結構域蛋白抗體B-細胞連接蛋白(BLNK)ELISA試劑盒
BAFFR ELISA Kit層粘連蛋白受體1抗體B-細胞激活因子受體(BAFFR)ELISA試劑盒
BAFF ELISA Kit層粘連蛋白受體1抗體B-細胞激活因子(BAFF)ELISA試劑盒
IκBKβ ELISA Kit磷酸化淋巴增強因子-1抗體B-細胞κ-輕肽基因增強子抑制因子激酶β(IκBKβ)ELISA試劑盒
BLC1 ELISA Kit層粘連相關多肽蛋白1抗體B-淋巴細胞趨化因子1(BLC1)ELISA試劑盒
LAB7-2 ELISA Kit淺表層粘膜蛋白多糖抗體B-淋巴細胞激活抗原B7-2(LAB7-2)ELISA試劑盒
BLK ELISA Kit調控胚胎干細胞分化蛋白Lhx2抗體B-淋巴酪氨酸激酶(BLK)ELISA試劑盒
SCARB1 ELISA KitLRRC2蛋白抗體B類清道夫受體1(SCARB1)ELISA試劑盒
BAGE5 ELISA Kit神經突觸蛋白NGL3抗體B-黑色素瘤抗原5(BAGE5)ELISA試劑盒
BAGE4 ELISA Kit致盲基因LCA5樣蛋白抗體B-黑色素瘤抗原4(BAGE4)ELISA試劑盒
BAGE3 ELISA Kit致盲基因LCA5蛋白抗體B-黑色素瘤抗原3(BAGE3)ELISA試劑盒
BAGE2 ELISA Kit轉錄因子LHX6抗體B-黑色素瘤抗原2(BAGE2)ELISA試劑盒
BAGE ELISA Kit磷酸化腫瘤抑制基因LATS1/LATS2抗體B-黑色素瘤抗原(BAGE)ELISA試劑盒
BANP ELISA Kit轉錄因子LBX1抗體BTG3關聯核蛋白(BANP)ELISA試劑盒
BRAF ELISA Kit神經細胞特異性轉錄因子LDB1抗體B-Raf原癌基因絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶(BRAF)ELISA試劑盒
BMPER ELISA Kit白細胞細胞化學吸引素2抗體BMP結合內皮調節因子(BMPER)ELISA試劑盒
BAMBI ELISA KitLHX5蛋白抗體BMP激活素膜結合抑制因子同源物(BAMBI)ELISA試劑盒
BPn ELISA Kit單絲氨酸蛋白激酶1+2抗體Biopyrrin蛋白(BPn)ELISA試劑盒
Bid ELISA KitLIN7C蛋白抗體BH3相互作用域死亡激動劑(Bid)ELISA試劑盒
BCL2L11 ELISA Kit富含亮氨酸重復序列Nogo受體反應蛋白4抗體Bcl2樣蛋白11(BCL2L11)ELISA試劑盒
MCL1 ELISA Kit富含亮氨酸α2糖蛋白抗體Bcl2相關髓細胞白血病序列1(MCL1)ELISA試劑盒
BAK1 ELISA Kit腦特異性磷脂酸磷酸酶樣蛋白1抗體Bcl2拮抗/殺傷因子1(BAK1)ELISA試劑盒
BAG3 ELISA Kit跨膜蛋白TMEM176B抗體Bcl2關聯永生基因3(BAG3)ELISA試劑盒
Bax ELISA Kit富含亮氨酸重復跨膜神經元蛋白2抗體Bcl2關聯X蛋白(Bax)ELISA試劑盒
BTS ELISA Kit富含亮氨酸重復跨膜神經元蛋白4抗體Battenin蛋白(BTS)ELISA試劑盒
BSN ELISA KitLZIC蛋白抗體Bassoon蛋白(BSN)ELISA試劑盒
AXOT ELISA KitLgi3蛋白抗體Axotrophin蛋白(AXOT)ELISA試劑盒
AXIN2 ELISA KitLhx4蛋白抗體Axis抑制蛋白2(AXIN2)ELISA試劑盒
ATRN ELISA Kit信號轉導分子SCDO3抗體Attractin蛋白(ATRN)ELISA試劑盒
ATN1 ELISA KitRNA聚合酶相關蛋白LEO1抗體Atrophin1蛋白(ATN1)ELISA試劑盒
ABCG2 ELISA Kit淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎病毒蛋白抗體ATP結合盒轉運蛋白G2(ABCG2)ELISA試劑盒
ABCG1 ELISA Kit自噬微管相關蛋白輕鏈3A/3B抗體ATP結合盒轉運蛋白G1(ABCG1)ELISA試劑盒
ABCA4 ELISA Kit黃體激素釋放激素/促性腺激素釋放激素抗體ATP結合盒轉運蛋白A4(ABCA4)ELISA試劑盒
ABCA3 ELISA KitLRRC23蛋白抗體ATP結合盒轉運蛋白A3(ABCA3)ELISA試劑盒

反應五要素:

參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。

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