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蟾分枝桿菌PCR檢測試劑盒說明書

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更新時間:2019-04-18 10:22:26瀏覽次數:200次

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蟾分枝桿菌PCR檢測試劑盒說明書用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種呼吸道及腸道致病菌,可實現對臨床樣品及其他環境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。

組成及試劑配制:
1、蟾分枝桿菌PCR檢測試劑盒說明書酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。

產品名稱英文名稱價格
蟾分枝桿菌PCR檢測試劑盒說明書Abalone Spherical VirusPCR電詢


樣本采集、存放及運輸:
1、樣本采集:各類型樣本按照常規方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應避免反復凍融(多凍融3次);
3、運輸:采用泡沫箱加冰密封進行運輸。
【標本要求】
人體鼻腔或咽部分泌物:用無菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物,將分泌物或咽拭子置入無菌玻璃管(含0.4ml滅菌生理鹽水),用無菌棉球將試管塞緊后,密閉送檢。標本可立即用于檢測,也可保存于-20℃待測。
【檢驗方法】
1.標本、對照品的核酸裂解處理
用商品化(取得醫療器械許可證)的RNA提取試劑盒處理標本,具體操作參見該試劑盒說明書。
或用Trizol法提取,方法如下:取100?l樣品置于1.5ml 離心管中,加入300?l裂解液(Trizol),再加入100, 混勻器上振蕩混勻5sec或顛倒混勻15次; 13000rpm離心15min, 吸取上層液體,加入等體積異丙醇,顛倒混勻室溫靜置10min, 13000rpm離心10min,輕輕倒去上清;加入700?l 75%乙醇,顛倒洗滌,13000rpm離心5min,輕輕倒去上清,倒置于吸水紙上,棄盡液體或4000rpm離心5sec,將管壁上的殘余液體甩到管底部,用微量加樣器盡量吸干液體,加入20?l DEPC-H2O溶解RNA。
2.試劑配制
取n×19?l H7N9核酸熒光PCR檢測混合液與n×1?l RT-PCR酶(n為反應管數),振蕩混勻數秒, 3000rpm離心數秒。
3.加樣取上述混合液20?l置于PCR管中,然后將樣品核酸提取液、DEPC-H2O、陽性對照品各5?l分別加入PCR管中,蓋好管蓋,立即進行PCR擴增反應。
4. PCR擴增反應管置于定量熒光PCR儀上,推薦循環參數設置:
45℃×10min; 95℃×15min;循環一次,再按95℃×15sec→60℃×60sec,循環45次;單點熒光檢測在60℃,反應體系為25?l。
熒光通道檢測選擇:選用FAM通道。

ERRα ELISA Kit高密度脂蛋白結合蛋白抗體雌激素受體相關受體α(ERRα)ELISA試劑盒
ERβ ELISA Kit轉錄因子HNF-3α抗體雌激素受體β(ERβ)ELISA試劑盒
ERα ELISA Kit熱休克蛋白β7抗體雌激素受體α(ERα)ELISA試劑盒
PTTG1IP ELISA KitE3連接酶抑制素受體2抗體垂體腫瘤轉化1相互作用蛋白(PTTG1IP)ELISA試劑盒
PACAPR ELISA Kit透明質酸及粘蛋白3抗體垂體腺苷酸環化酶激活肽受體(PACAPR)ELISA試劑盒
ADCYAP1 ELISA Kit22號染色體開放閱讀框28抗體垂體腺苷酸環化酶激活肽(ADCYAP1)ELISA試劑盒
PRF1 ELISA Kit14號染色體開放閱讀框94抗體穿孔素1(PRF1)ELISA試劑盒
HPR ELISA Kit四磷酸鳥苷水解酶抗體觸珠蛋白相關蛋白(HPR)ELISA試劑盒
AMBN ELISA Kit人類免疫缺陷病毒2型/2型艾滋病病毒gp36抗體成釉細胞蛋白(AMBN)ELISA試劑盒
FGFRL1 ELISA Kit激素上調神經腫瘤相關激酶抗體成纖維細胞生長因子受體樣蛋白1(FGFRL1)ELISA試劑盒
FGFR4 ELISA Kitβ氨基己糖苷酶A抗體成纖維細胞生長因子受體4(FGFR4)ELISA試劑盒
FGFR3 ELISA Kit肌側索硬化癥相關蛋白HECW1抗體成纖維細胞生長因子受體3(FGFR3)ELISA試劑盒
FGFR2 ELISA Kit3-羥氨苯甲酸雙加氧酶抗體成纖維細胞生長因子受體2(FGFR2)ELISA試劑盒
FGFR1 ELISA Kit舞蹈癥相關蛋白40/凝血因子8相關蛋白/第八因子相關蛋白抗體成纖維細胞生長因子受體1(FGFR1)ELISA試劑盒
FGF7 ELISA Kit舞蹈癥相關相互作用蛋白1/雌激素相關受體樣蛋白1抗體成纖維細胞生長因子7(FGF7)ELISA試劑盒
FGF5 ELISA Kit舞蹈癥蛋白相互作用蛋白13抗體成纖維細胞生長因子5(FGF5)ELISA試劑盒
FGF3 ELISA Kit神經性舞蹈病蛋白抗體成纖維細胞生長因子3(FGF3)ELISA試劑盒
FGF21 ELISA Kit舞蹈癥相關蛋白1抗體成纖維細胞生長因子21(FGF21)ELISA試劑盒
FGF19 ELISA Kit亨廷頓相互作用蛋白1抗體成纖維細胞生長因子19(FGF19)ELISA試劑盒
FGF18 ELISA Kit葡萄糖氧化酶1抗體成纖維細胞生長因子18(FGF18)ELISA試劑盒
FGF17 ELISA Kit轉錄調節因子HOXD9抗體成纖維細胞生長因子17(FGF17)ELISA試劑盒
FGF13 ELISA Kit羥基酰谷胱甘肽水解酶樣蛋白抗體成纖維細胞生長因子13(FGF13)ELISA試劑盒
FGF12 ELISA Kit熱休克蛋白受體家族蛋白7B2抗體成纖維細胞生長因子12(FGF12)ELISA試劑盒
FGF11 ELISA KitHeme結合蛋白2抗體成纖維細胞生長因子11(FGF11)ELISA試劑盒
FAPα ELISA Kit肝細胞粘附分子2抗體成纖維細胞激活蛋白α(FAPα)ELISA試劑盒
NBL1 ELISA Kit氨基己糖苷酶D抗體成神經細胞瘤抑制瘤變蛋白1(NBL1)ELISA試劑盒
MyoD ELISA KitHHLA2蛋白抗體成肌分化蛋白(MyoD)ELISA試劑盒

反應五要素:

參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。

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