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組成及試劑配制:
1、雞敗血支原體PCR檢測試劑盒說明書 酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
產品名稱 | 英文名稱 | 價格 |
雞敗血支原體PCR檢測試劑盒說明書 | Abalone Spherical VirusPCR | 電詢 |
樣本采集、存放及運輸:
1、樣本采集:各類型樣本按照常規方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應避免反復凍融(多凍融3次);
3、運輸:采用泡沫箱加冰密封進行運輸。
【標本要求】
人體鼻腔或咽部分泌物:用無菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物,將分泌物或咽拭子置入無菌玻璃管(含0.4ml滅菌生理鹽水),用無菌棉球將試管塞緊后,密閉送檢。標本可立即用于檢測,也可保存于-20℃待測。
【檢驗方法】
1.標本、對照品的核酸裂解處理
用商品化(取得醫療器械許可證)的RNA提取試劑盒處理標本,具體操作參見該試劑盒說明書。
或用Trizol法提取,方法如下:取100?l樣品置于1.5ml 離心管中,加入300?l裂解液(Trizol),再加入100, 混勻器上振蕩混勻5sec或顛倒混勻15次; 13000rpm離心15min, 吸取上層液體,加入等體積異丙醇,顛倒混勻室溫靜置10min, 13000rpm離心10min,輕輕倒去上清;加入700?l 75%乙醇,顛倒洗滌,13000rpm離心5min,輕輕倒去上清,倒置于吸水紙上,棄盡液體或4000rpm離心5sec,將管壁上的殘余液體甩到管底部,用微量加樣器盡量吸干液體,加入20?l DEPC-H2O溶解RNA。
2.試劑配制
取n×19?l H7N9核酸熒光PCR檢測混合液與n×1?l RT-PCR酶(n為反應管數),振蕩混勻數秒, 3000rpm離心數秒。
3.加樣取上述混合液20?l置于PCR管中,然后將樣品核酸提取液、DEPC-H2O、陽性對照品各5?l分別加入PCR管中,蓋好管蓋,立即進行PCR擴增反應。
4. PCR擴增反應管置于定量熒光PCR儀上,推薦循環參數設置:
45℃×10min; 95℃×15min;循環一次,再按95℃×15sec→60℃×60sec,循環45次;單點熒光檢測在60℃,反應體系為25?l。
熒光通道檢測選擇:選用FAM通道。
DEFβ127 ELISA Kit艾滋病病毒抗體防御素β127(DEFβ127)ELISA試劑盒
DEFβ126 ELISA Kit艾滋病病毒抗體防御素β126(DEFβ126)ELISA試劑盒
DEFβ125 ELISA Kit艾滋病病毒抗體防御素β125(DEFβ125)ELISA試劑盒
DEFβ124 ELISA Kit結合珠蛋白相關蛋白抗體防御素β124(DEFβ124)ELISA試劑盒
DEFβ123 ELISA KitL-組氨酸脫羧酶抗體防御素β123(DEFβ123)ELISA試劑盒
DEFβ121 ELISA Kit乙型肝炎病毒X蛋白相互作用蛋白防御素β121(DEFβ121)ELISA試劑盒
DEFβ119 ELISA Kit組蛋白H2B.s抗體防御素β119(DEFβ119)ELISA試劑盒
DEFβ118 ELISA Kit組蛋白去乙酰化酶4+5+9抗體防御素β118(DEFβ118)ELISA試劑盒
DEFβ116 ELISA Kit熱休克蛋白27相關蛋白1抗體防御素β116(DEFβ116)ELISA試劑盒
DEFβ115 ELISA Kit卟膽原脫氨酶抗體防御素β115(DEFβ115)ELISA試劑盒
DEFβ114 ELISA Kit異質核糖核蛋白U2樣蛋白抗體防御素β114(DEFβ114)ELISA試劑盒
DEFβ113 ELISA Kit肝癌衍生生長因子2抗體防御素β113(DEFβ113)ELISA試劑盒
DEFβ112 ELISA Kit肝癌相關抗原抗體57抗體防御素β112(DEFβ112)ELISA試劑盒
DEFβ110 ELISA Kit補體C3抗體防御素β110(DEFβ110)ELISA試劑盒
DEFβ103B ELISA Kit甲型流感病毒血凝素抗體防御素β103B(DEFβ103B)ELISA試劑盒
DEFβ103A ELISA Kit甲狀旁腺功能亢進蛋白2/細胞分裂周期73抗體防御素β103A(DEFβ103A)ELISA試劑盒
DEFβ1 ELISA Kit線粒體絲氨酸蛋白酶抗體防御素β1(DEFβ1)ELISA試劑盒
DEFα6 ELISA Kit鉀/鈉超極化激活環核苷酸門控通道蛋白2抗體防御素α6(DEFα6)ELISA試劑盒
DEFα5 ELISA Kit熱休克蛋白β7抗體防御素α5(DEFα5)ELISA試劑盒
DEFα3 ELISA Kit鉀/鈉超極化激活環核苷酸門控通道蛋白3抗體防御素α3(DEFα3)ELISA試劑盒
DEFα1 ELISA Kit鐵調節蛋白25抗體防御素α1(DEFα1)ELISA試劑盒
AADAC ELISA KitHD域內含蛋白2抗體芳乙酰胺去乙酰化酶(AADAC)ELISA試劑盒
ARO ELISA Kit艾滋病病毒p55抗體芳香酶(ARO)ELISA試劑盒
AANAT ELISA Kit造血細胞激酶抗體芳香胺-N-乙酰基轉移酶(AANAT)ELISA試劑盒
AHRR ELISA KitHEAT重復內含蛋白5B蛋白抗體芳烴受體抑制因子(AHRR)ELISA試劑盒
AFMID ELISA Kit缺氧誘導基因1B蛋白抗體芳犬尿氨酸甲酰胺酶(AFMID)ELISA試劑盒
ARSK ELISA Kit乙酰化組蛋白H4抗體芳基硫酸酯酶K(ARSK)ELISA試劑盒
ARSJ ELISA Kit熱休克蛋白B2抗體芳基硫酸酯酶J(ARSJ)ELISA試劑盒
ARSI ELISA Kit人類白細胞抗原抗體B27芳基硫酸酯酶I(ARSI)ELISA試劑盒
ARSH ELISA Kit螺旋環螺旋轉錄因子HATH6抗體芳基硫酸酯酶H(ARSH)ELISA試劑盒
ARSG ELISA Kit神經調節蛋白1β2抗體芳基硫酸酯酶G(ARSG)ELISA試劑盒
ARSF ELISA KitHDHD3蛋白抗體芳基硫酸酯酶F(ARSF)ELISA試劑盒
ARSE ELISA KitHEATR3蛋白抗體芳基硫酸酯酶E(ARSE)ELISA試劑盒
ARSD ELISA Kit癌增強蛋白抗體芳基硫酸酯酶D(ARSD)ELISA試劑盒
ARSB ELISA Kit單甲基組蛋白H3K9抗體芳基硫酸酯酶B(ARSB)ELISA試劑盒
ARSA ELISA KitHDHD2B蛋白抗體芳基硫酸酯酶A(ARSA)ELISA試劑盒
PANK4 ELISA Kit造血干細胞特異性相關結合蛋白1抗體泛酸激酶4(PANK4)ELISA試劑盒
PANK3 ELISA KitI類組織相容性H-2抗原抗體D-Dalpha鏈抗體泛酸激酶3(PANK3)ELISA試劑盒
PANK2 ELISA KitHEAT重復內含蛋白5A蛋白抗體泛酸激酶2(PANK2)ELISA試劑盒
PANK1 ELISA Kit熱休克蛋白70抗體泛酸激酶1(PANK1)ELISA試劑盒
USP8 ELISA Kit羥類固醇脫氫酶17β抗體泛素特異性肽酶8(USP8)ELISA試劑盒
UCHL1 ELISA Kit透明質酸結合蛋白4抗體泛素羧基端酯酶L1(UCHL1)ELISA試劑盒
UBE3A ELISA KitA型流感病毒H5N1凝集素抗體泛素連接酶E3A(UBE3A)ELISA試劑盒
UBE2L3 ELISA KitA型流感病毒核衣殼蛋白抗體泛素結合酶E2C結合蛋白E2L3(UBE2L3)ELISA試劑盒
UBE2C ELISA KitA型流感病毒核衣殼蛋白抗體泛素結合酶E2C(UBE2C)ELISA試劑盒
UBE2A ELISA KitA型流感病毒核衣殼蛋白抗體泛素結合酶E2A(UBE2A)ELISA試劑盒
UCRP ELISA KitB型流感病毒蛋白抗體泛素交叉反應蛋白(UCRP)ELISA試劑盒
UBE1L ELISA Kit人類狀瘤病毒16-E7抗體泛素激活酶樣蛋白(UBE1L)ELISA試劑盒
UBAP2 ELISA Kit跨膜蛋白酶絲氨酸1抗體泛素關聯蛋白2(UBAP2)ELISA試劑盒
UBR4 ELISA Kit肺癌癌基因蛋白3抗體泛素蛋白連接酶E3成分N-識別蛋白4(UBR4)ELISA試劑盒
UBD ELISA Kit高密度脂蛋白抗體泛素D(UBD)ELISA試劑盒
UBC ELISA Kit蛋白激酶底物相關蛋白抗體泛素C(UBC)ELISA試劑盒
Ub ELISA Kit艾滋病病毒抗體泛素(Ub)ELISA試劑盒
反應五要素:
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
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