細胞簡介：

大鼠肝星形分離自肝臟組織；肝臟是身體內以代謝功能為主的一個器官，并在身體里面起著去氧化、儲存肝糖、分泌性蛋白質的合成等作用；肝臟也制造消化系統(tǒng)中之膽汁。肝臟是機體內臟里最大的器官，位于機體中的腹部位置，在右側橫隔膜之下，位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方，胃的上方。肝臟是機體消化系統(tǒng)中最大的消化腺，為一紅棕色的V字形器官。肝臟是尿素合成的主要器官，又是新陳代謝的重要器官。肝臟在機體位置和形態(tài)結構：肝臟位于右上腹，隱藏在右側膈下和肋骨深面，大部分肝為肋弓所復蓋，僅在腹上區(qū)、右肋弓間露出并直接接觸腹前壁，肝上面則與膈及腹前壁相接。肝星形細胞（HSC）又名肝貯脂細胞、貯存細胞、竇周細胞、Ito細胞等，是肝臟細胞外基質的主要來源。HSC在激活后可進一步轉化為肌成纖維細胞樣細胞，各種可導致肝纖維化的因素均將HSC作為最終靶細胞。正常情況下，HSC處于靜止狀態(tài)，當肝臟發(fā)生炎癥反應或受到機械刺激等損傷時，HSC的表型由靜止型轉變?yōu)榧せ钚停せ畹腍SC可通過增生和分泌細胞外基質參與肝纖維化的形成及肝內結構的重建，此過程也是肝纖維化的中心環(huán)節(jié)。肝星形細胞分布于肝臟的Disse間隙內，是合成、分泌細胞外基質的主要來源，在肝纖維化的發(fā)生中處于最重要地位。肝星形細胞是肝臟的間充質細胞，約占肝臟細胞總數的8%-13%。作為肝臟合成細胞外基質的主要細胞群，肝星形細胞不僅能分泌蛋白多糖、糖蛋白等細胞外基質成分，合成一定量的膠原酶以維持正常的基底膜結構，還能通過其突起的收縮參與肝竇的微循環(huán)調節(jié)。此外，肝星形細胞能通過合成肝細胞生長因子、胰島素樣生長因子、表皮生長因子等促進肝細胞增殖和肝再生。
方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠肝星形采用混合酶灌流消化、低速離心、密度梯度離心制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測：

公司實驗室分離的大鼠肝星狀經α-SMA、Desmin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

1、您收到細胞后，請按照以下方法進行操作：

取出T-25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置4-6小時或過夜，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)，然后換用新鮮培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進行傳代。

2、細胞傳代：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.125%消化液約2ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1500rpm/min，離心5min；

3）棄上清，沉淀細胞用12ml培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進行分瓶傳代，放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）待細胞貼壁后，觀察培養(yǎng)結果，之后進行換液培養(yǎng)或傳代。

3、細胞凍存：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.125%消化液約2ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后輕輕吹打細胞使之脫落，再加入培養(yǎng)液終止消化，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1500rpm/min，離心5min；

3）用適當量的凍存液（基礎培養(yǎng)基：FBS：DMSO=7:2:1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉入液氮中進行長期保存。

4、細胞復蘇：

1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具）， 快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2）將凍存管中的細胞移至15ml無菌離心管中，滴加入培養(yǎng)液5ml混勻細胞，然后將細胞懸液轉移至適當面積大小的培養(yǎng)皿中；

3）放置于37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）第二天，換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

1) 將5-10d的乳鼠浸泡入75%乙醇中，移入生物安全柜，

2) 從胸部解剖乳鼠，取出雙肺置于預冷的PBS中，盡可能的除去結締組織等，

3) 取肺邊緣部分，剪碎，將組織塊移入T25培養(yǎng)瓶中，倒置于細胞培養(yǎng)箱中，

4) 2h后，培養(yǎng)瓶中注入2 mL內皮培養(yǎng)基，小心將培養(yǎng)瓶正置于培養(yǎng)箱，確保組織塊不會飄起來，

5) 每3d換液2mL，待細胞從組織塊中爬出來后，隔2d換液，待細胞融合達到60-70%左右時，去除組織塊，將肺微血管內皮細胞重新鋪瓶。