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1.細胞系培養初期:保證培養基與微球體處于穩定的PH與溫度水平,接種細胞(對數生長期,而非穩定期)至終體積1/3的培養液中,以增加細胞與微載體接觸的機會。不同的微載體所用濃度及接種細胞密度是不同的。常使用2-3g/L的微載體含量,更高的微載體濃度需要控制環境或經常換液。
2.貼壁階段(3-8d)后,緩慢加入培養液至工作體積,并且增加攪拌速度保證*均質混合。
3.培養維持期:進行細胞計數(胞核計數)、葡萄糖測定及細胞形態鏡檢。隨意細胞系增殖,微球變得越來越重,需增加攪拌速率。經過3d左右,培養液開始呈酸性,需換液:停止攪拌,讓微珠沉淀5min,棄掉適宜體積的培養液,緩慢加入新鮮培養液(37℃),重新開始攪拌。
4.收獲細胞:首先排干培養液,至少用緩沖液漂洗1遍,然后加入相應的酶,快速攪拌(75-125r/min)20-30min。然后解離收集細胞及其產品。
5.微載體培養的放大:可以通過增加微載體的含量或培養體積進行放大。使用異倍體或原代細胞系培養疫苗、干擾素,已被放大至4000L以上。
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