當前位置:上海研生實業有限公司>>技術文章>>人正常組織來源細胞培養中的6個常見錯誤
當培養人正常組織來源細胞時,重要的是要記住,他們不是細胞系,不能同等對待。因為ScienCell在原代細胞培養方面的廣泛工作,我們非常熟悉研究人員在培養原代細胞時遇到的常見問題。這里有六個在原代細胞培養中的常見錯誤,以及如何糾正這些錯誤。
錯誤#1:一小管原代細胞在水浴中解凍一段時間
糾正#1:原代細胞對解凍過程非常敏感,因此將小瓶置于37℃水浴中,保持并輕輕旋轉直到內容物剛剛解凍是很重要的。然后應立即從水浴中取出小瓶,并轉移到無菌操作臺。確保您的培養瓶在解凍前已經準備就緒,以便可以立即用于接種細胞,并置于培養箱中。
錯誤#2:解凍小瓶后直接離心原代細胞
糾正#2:我們不建議在解凍后離心細胞,因為離心程序比少量的DMSO殘留更有害。記住,在恢復原代細胞后的第二天更換培養基以去除任何殘留的DMSO。
錯誤#3:允許原代細胞變得過于融合
糾正#3:當生長至100%匯合時,原代細胞可以變得衰老。記住,原代細胞不是100%純,因此重要的是盡量減少污染細胞的生長。我們建議在細胞達到90-95%融合時,對原代細胞進行傳代培養。
錯誤#4:傳代原代細胞時過度胰蛋白酶消化
糾正#4:當細胞傳代時,使用低濃度的胰蛋白酶并在顯微鏡下密切監測細胞。此外,記得在胰蛋白酶消化后*中和細胞中的胰酶,因為任何活性的胰蛋白酶都將損傷細胞。我們特別推薦專門為原代細胞配制的胰蛋白酶中和溶液(Cat#0113),但也可以使用10%血清或大豆胰蛋白酶抑制劑(Cat#0173)。
錯誤#5:原代細胞可以很容易地重新凍存
糾正#5:通常我們不推薦重新凍存原代細胞,因為這可以促進細胞衰老和/或導致功能變化。原代細胞非常敏感,重新凍結可能導致細胞死亡或損傷。
錯誤6:原代細胞可以無限的增殖
糾正#6:與細胞系不同,原代細胞具有有限的擴增能力。我們建議盡早使用原代細胞進行實驗以防止遺傳漂移。此外,如果你正在使用一個增值困難的細胞類型,你應該密切監測細胞形態,因為少量混雜的細胞(如成纖維細胞)可能隨著時間的推移,大量生長從而成為主要細胞。
在培養人正常組織來源細胞時,記住這六個技術提示是非常重要的。Z終,如果你認真、仔細的對待你的細胞,它們也會更好地為你的實驗服務。
內皮細胞的分化蛋白6IgG 人二胺氧化酶(DAO)
內皮抑素/內皮他丁IgG 人兒茶酚胺(CA)
內皮因子維生素B12受體IgG 人多藥耐藥相關蛋白(MRP)
內皮脂肪酶IgG 人多形核白彈性蛋白酶(PMN Elastase)
內皮脂肪酶IgG 人多效生長因子(PTN)
內收蛋白IgG 人多肽YY(Peptide-YY)
內涎蛋白/內皮唾液酸蛋白IgG 人多免疫球蛋白受體(poly-IgR)
內脂素/內臟脂肪素(C端)IgG 人多聚血清蛋白(PHSA)
內脂素/內臟脂肪素(N端)IgG 人多聚ADP核糖聚合酶(PARP)
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