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如何正確使用酶結合物?

時間:2019/3/27閱讀:346
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ELISA試劑盒實驗原理

酶聯(lián)免疫吸附測定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)原理

1971年Engvall和Perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定(enzyme linked immunosorbent 

assay,ELISA)用于IgG定量測定的文章,使得1966年開始用于抗原定位的酶標抗體技術發(fā)展成

液體標本中微量物質的測定方法。

大鼠ELISA試劑盒的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗

體仍保持其免疫學活性,酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性,又保留酶的活性。在測定

時,受檢標本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使

固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質分開。再加入酶標記的抗原或抗體,也

通過反應而結合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。加入

酶反應的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標本中受檢物質的量直接相關,故

可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。

由于酶的催化頻率很高,故可極大地地放大反應效果,從而使測定方法達到很高的敏感度

如何正確使用酶結合物?

1.酶結合物的稀釋液

在稀釋液中常加入高濃度的無關蛋白質(例如1%BSA或5%脫脂奶粉),通過競爭抑制酶結合物在

固相載體上的非特異性吸附。一般還加入能夠抑制蛋白質吸附于塑料表面的非離子型表面活性

劑,如吐溫20(0.05%的濃度較為適宜)。

2.正確稀釋酶結合物

酶結合物的合適工作濃度需要通過預實驗來確定,濃度過高易導致本底偏高,濃度過低則會導

致陽性信號的減弱。

酶結合物在使用前稀釋,稀釋后的酶結合物不宜長期保存,因為低濃度的酶結合物極易失

活。

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