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禽白血病/肉瘤病毒PCR檢測試劑盒注意事項

時間:2021/3/3閱讀:168
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 禽白血病/肉瘤病毒PCR檢測試劑盒注意事項:   

1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。設立一個的PCR實驗室。

2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。

3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。

4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。

5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。

6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。

7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。

實驗要點:
1.CTAB 溶液在低于15℃時會析出沉淀,因此在將其加入冷凍的植物材料中之前必須預熱。  
2.在適條件下,DNA—CTAB 沉淀呈白色纖維狀,很容易一下子就從溶液中鉤出。不過,某些植物種的DNA 沉淀中可能含有雜質,特別是多糖,使DNA 沉淀呈絮狀或膠狀,這種情況下可能需要稍事離心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。 
3.雖然可有效地使蛋白質變性,但酚不能*抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用苯酚的混合液,可減輕這兩種現象,同時可加入適量的,的作用是消泡,并使蛋白質層緊密,使水相和有機相分層較好。 細菌的培養和收集 將含有質粒pBS 的DH5α菌種接種在LB 固體培養基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培養12-24 小時。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB 液體培養基(含50μg/ml Amp)中,37℃振蕩培養約12 小時至對數生長后期。小量提取法對于從大量轉化子中制備少量部分純化的質粒DNA 十分有用。這些方法共同特點是簡便、快速,能同時處理大量試樣,所得DNA 有一定純度,可滿足限制酶切割、電泳分析的需要。

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