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小鼠誘導性多潛能干細胞細胞株培養的具體無菌技術要點

時間:2021/6/23閱讀:175
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小鼠誘導性多潛能干細胞細胞株培養的具體無菌技術要點:

1. 實驗開始前,無菌室和無菌操作臺需要紫外光照射30到60分鐘*滅菌,用70%擦拭無菌操作臺面,并且打開無菌操作臺風扇運行10分鐘之后,才可以進行實驗操作。每次操作只能處理一株細胞株,即使培養基*相同也不可共用培養基,以避免細胞間污染或失誤混淆。實驗完成后,請將實驗物品拿出工作臺,用70%再次擦拭無菌操作臺面。操作間隔應該讓無菌操作臺運轉10分鐘到15分鐘后,才能進行下一個細胞株的操作。
2. 無菌操作工作的區域應保持清潔和寬敞,必要物品(試管架、吸管、吸取器或吸管盒等)可以暫時放置,其它實驗用品使用完畢后應移出,有利于空氣流通。實驗用品需70%擦拭后方可帶入無菌操作臺內。實驗操作過程應在臺面的中央無菌區域內完成,請勿在邊緣非無菌區域進行操作。
3. 小心取用無菌實驗物品,避免細菌污染。請勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處,也不要在打開的容器正上方進行操作。容器打開后,請用手夾住瓶蓋并輕握瓶身,傾斜大約45°角取用,盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。
4. 工作人員應當首先注意自身安全,必須穿戴齊實驗衣和實驗手套后才能進行實驗。對于病毒感染或是來自人類的細胞株應當特別小心操作,并選擇適當等級的無菌操作臺進行(至少是Class II)。操作過程中,應避免引起aerosol的產生,小心有毒性藥品,例如DMSO和TPA等,并避免針頭的傷害等等。
5. 定期檢測下列項目:
5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力
5.2. CO2培養箱的CO2濃度、溫度、和水盤是否有污染(水盤的水需用無菌水,每周定時更換)。
5.3. 無菌操作臺內的airflow壓力,定期更換紫外線燈管和HEPA過濾膜,預濾網(300小時/預濾網,3000小時/HEPA)。
6. 水槽內可添加消毒劑(Zephrin 1:750),需定期更換水槽中的水。

EC109,人食管癌細胞
HGC-27人胃癌細胞
AGS人胃腺癌細胞
U251人膠質瘤細胞
THP-1人單核白血病細胞
HuH-7人肝癌細胞
RBE, 人肝膽管癌細胞
MiaPaCa-2, 人胰腺癌細胞
KM3, 人多發性骨髓瘤細胞
QGY-7701, 人肝癌細胞
PANC-1, 人胰腺癌細胞
U266B1 [U266], 人多發性骨髓瘤細胞
Hep G2, 人肝癌細胞系
PC-12(高分化),PC12,大鼠腎上腺髓質嗜鉻瘤分化細胞株(高分化)
GH3, 大鼠垂體生長激素腺瘤
Hepa 1-6, 小鼠肝癌細胞
QBC-939, 人膽管癌細胞
B16-F10, 小鼠黑色素瘤高轉移細胞
SGC-7901, 人胃腺癌細胞系
SK-N-SH, 人神經母細胞瘤細胞
SK-MEL-1, 人皮膚黑色素瘤細胞
A549, 人肺癌細胞系

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