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原代細胞培養(yǎng)生存期的三個階段

時間:2017-11-3閱讀:87
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1. 原代細胞潛伏期(latent phase) :

接種 經(jīng)過 懸浮期(細胞質(zhì)回縮,胞體呈圓球形) 貼壁。

初代培養(yǎng)細胞 經(jīng)過 10~24小時或更多時間。

連續(xù)細胞系和癌細胞系 經(jīng)過 10~30分鐘 貼附。

貼附現(xiàn)象是一個非常復(fù)雜和受多種因素的影響。

影響細胞貼附:底物表面不干凈,影響細胞貼附。

利于細胞貼附:底物表面帶有陽性物質(zhì)與特殊物質(zhì):

纖粘連蛋白(fibronectin FN)、

細胞表面蛋白(cell surface proteinCSP)
這些物質(zhì)有的存在與細胞表面,有的來自血清。

潛伏期特點:

長短與細胞接種密度、種類、使用的培養(yǎng)基性質(zhì)有關(guān)。

(1)細胞貼附后進入潛伏期,細胞無增殖。少見分裂相,細胞有運動活動。

(2)初代培養(yǎng) 細胞潛伏期約為24~96小時或更長,

連續(xù)細胞系和腫瘤細胞潛伏期約6~24小時。

(3)細胞接種密度大潛伏期短。

(4)細胞出現(xiàn)分裂相增多時,標(biāo)志細胞進入指數(shù)增生期。

2.指數(shù)增生期(logarithmic growth phase):

特點:細胞增殖Z旺盛階段,分裂相增多。

細胞分裂指數(shù)(mitotie index MI) :

表示每1000個細胞中的分裂相數(shù)。

條件:分裂相數(shù)與細胞種類、培養(yǎng)成分、pH培養(yǎng)箱溫度有關(guān)。

細胞分裂指數(shù):

初代細胞:在0.1%~0.5%之間% ,

連續(xù)分裂細胞和腫瘤細胞:3 ~5% 

指數(shù)增生期是作為細胞一代活力的時期,是進行實驗和Z主要的階段。 

指數(shù)增生期持續(xù)3~5天,細胞數(shù)量增多后生長空間變小,細胞相互接觸可連接成片。 

正常細胞:細胞相互接觸能抑制細胞運動,這種現(xiàn)象稱為接觸抑制(contact inhibition)。 

腫瘤細胞:沒有這種現(xiàn)象,可作為區(qū)別正常與腫瘤細胞的標(biāo)志之一。當(dāng)腫瘤細胞達到一定密度后向三維空間發(fā)展,使細胞發(fā)生堆積(piled up)。 

由于細胞不斷增殖分裂,細胞數(shù)量持續(xù)增多,培養(yǎng)液的營養(yǎng)成分減少,代謝產(chǎn)物增多,細胞受營養(yǎng)的枯竭和代謝物的影響,則發(fā)生密度抑制(Density inhibition),導(dǎo)致細胞分裂停止。 

3.停滯期(stagnate phase) 

細胞量和密度達到飽和,細胞停滯增殖。表明細胞進入到停滯期,細胞數(shù)量持平,也稱為平頂期(plateau)。 

特點:原代細胞不增殖,有代謝活動。培養(yǎng)液中的營養(yǎng)已逐漸耗盡,代謝產(chǎn)物積累增多,pH降低,此時需要傳代,否則細胞將會中毒,發(fā)生形態(tài)改變,細胞會從底物脫落死亡。 

注意: 

傳代過晚將影響下一代細胞的生長,至少要再傳 1~2代 ,通過換液淘汰死細胞和受損較輕的細胞。待細胞全部恢復(fù)后再用。
*        100克    氣單胞菌鑒別瓊脂
*        100克    血瓊脂基礎(chǔ)2號
*        1公斤    液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基
*        100克    卵黃高鹽瓊脂基礎(chǔ)
*    RT    25克    胰膘肉湯基礎(chǔ)
*        25公斤    0.5%純度葡萄糖肉湯培養(yǎng)基
*        40克    固體改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基
*        500毫升    聚山梨酯80培養(yǎng)基(真菌)
*    RT    100克    改良沙氏瓊脂培養(yǎng)基
原代細胞

 

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