當(dāng)前位置:上海研生實業(yè)有限公司>>公司動態(tài)>>原代細胞培養(yǎng)生存期的三個階段
1. 原代細胞潛伏期(latent phase) :
接種 經(jīng)過 懸浮期(細胞質(zhì)回縮,胞體呈圓球形) 貼壁。
初代培養(yǎng)細胞 經(jīng)過 10~24小時或更多時間。
連續(xù)細胞系和癌細胞系 經(jīng)過 10~30分鐘 貼附。
貼附現(xiàn)象是一個非常復(fù)雜和受多種因素的影響。
影響細胞貼附:底物表面不干凈,影響細胞貼附。
利于細胞貼附:底物表面帶有陽性物質(zhì)與特殊物質(zhì):
纖粘連蛋白(fibronectin FN)、
細胞表面蛋白(cell surface proteinCSP)
這些物質(zhì)有的存在與細胞表面,有的來自血清。
潛伏期特點:
長短與細胞接種密度、種類、使用的培養(yǎng)基性質(zhì)有關(guān)。
(1)細胞貼附后進入潛伏期,細胞無增殖。少見分裂相,細胞有運動活動。
(2)初代培養(yǎng) 細胞潛伏期約為24~96小時或更長,
連續(xù)細胞系和腫瘤細胞潛伏期約6~24小時。
(3)細胞接種密度大潛伏期短。
(4)細胞出現(xiàn)分裂相增多時,標(biāo)志細胞進入指數(shù)增生期。
2.指數(shù)增生期(logarithmic growth phase):
特點:細胞增殖Z旺盛階段,分裂相增多。
細胞分裂指數(shù)(mitotie index MI) :
表示每1000個細胞中的分裂相數(shù)。
條件:分裂相數(shù)與細胞種類、培養(yǎng)成分、pH培養(yǎng)箱溫度有關(guān)。
細胞分裂指數(shù):
初代細胞:在0.1%~0.5%之間% ,
連續(xù)分裂細胞和腫瘤細胞:3 ~5%
指數(shù)增生期是作為細胞一代活力的時期,是進行實驗和Z主要的階段。
指數(shù)增生期持續(xù)3~5天,細胞數(shù)量增多后生長空間變小,細胞相互接觸可連接成片。
正常細胞:細胞相互接觸能抑制細胞運動,這種現(xiàn)象稱為接觸抑制(contact inhibition)。
腫瘤細胞:沒有這種現(xiàn)象,可作為區(qū)別正常與腫瘤細胞的標(biāo)志之一。當(dāng)腫瘤細胞達到一定密度后向三維空間發(fā)展,使細胞發(fā)生堆積(piled up)。
由于細胞不斷增殖分裂,細胞數(shù)量持續(xù)增多,培養(yǎng)液的營養(yǎng)成分減少,代謝產(chǎn)物增多,細胞受營養(yǎng)的枯竭和代謝物的影響,則發(fā)生密度抑制(Density inhibition),導(dǎo)致細胞分裂停止。
3.停滯期(stagnate phase)
細胞量和密度達到飽和,細胞停滯增殖。表明細胞進入到停滯期,細胞數(shù)量持平,也稱為平頂期(plateau)。
特點:原代細胞不增殖,有代謝活動。培養(yǎng)液中的營養(yǎng)已逐漸耗盡,代謝產(chǎn)物積累增多,pH降低,此時需要傳代,否則細胞將會中毒,發(fā)生形態(tài)改變,細胞會從底物脫落死亡。
注意:
傳代過晚將影響下一代細胞的生長,至少要再傳 1~2代 ,通過換液淘汰死細胞和受損較輕的細胞。待細胞全部恢復(fù)后再用。
* 100克 氣單胞菌鑒別瓊脂
* 100克 血瓊脂基礎(chǔ)2號
* 1公斤 液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基
* 100克 卵黃高鹽瓊脂基礎(chǔ)
* RT 25克 胰膘肉湯基礎(chǔ)
* 25公斤 0.5%純度葡萄糖肉湯培養(yǎng)基
* 40克 固體改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基
* 500毫升 聚山梨酯80培養(yǎng)基(真菌)
* RT 100克 改良沙氏瓊脂培養(yǎng)基
原代細胞
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